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PCR檢測(cè)試劑盒

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更新時(shí)間:2023-02-28 15:13:57瀏覽次數(shù):351

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T
應(yīng)用領(lǐng)域 化工 主要用途 僅供科研實(shí)驗(yàn)
英文名稱 Bacillus?licheniformisPCR 規(guī)格 50T
PCR檢測(cè)試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品:肽酶D(PEPD)重組蛋白
過(guò)氧蛋白同源物(PXDN)重組蛋白
類固醇5α還原酶1(SRD5a1)重組蛋白
類固醇5α還原酶1(SRD5a1)重組蛋白
饑餓素-O-乙?;D(zhuǎn)移酶(GOAT)重組蛋白

詳細(xì)介紹

實(shí)時(shí)熒光定量PCR
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限,實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度,并記錄在電腦軟件之中,通過(guò)對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR無(wú)需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的:

1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí),剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期(對(duì)數(shù)期),此時(shí)微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性,即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增,得到的Ct值是恒定的。

2)Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測(cè)定,因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。

外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,重現(xiàn)性定量方法,已得到,廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測(cè)等諸多領(lǐng)域。

5.png

產(chǎn)品名稱:PCR檢測(cè)試劑盒
規(guī)格:50T
分類:PCR檢測(cè)試劑盒
儲(chǔ)存條件:-20
避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。

操作流程

收集基因信息——>設(shè)計(jì)引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細(xì)胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽(yáng)性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測(cè)序——>測(cè)序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫(kù)——>質(zhì)粒實(shí)物保存。

產(chǎn)品名稱

英文名稱

規(guī)格

PCR檢測(cè)試劑盒

PCR

50T

下列相關(guān)產(chǎn)品:

ⅣD組磷脂酶A2(PLA2G4D)重組蛋白

高溫需求因子A4(HTRA4)重組蛋白

ⅫB組磷脂酶A2(PLA2G12B)重組蛋白

解整合素金屬蛋白酶33(ADAM33)重組蛋白

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法

1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer

5 μl     dNTP mix(2mM)

4 μl引物1(10pM)

2 μl引物2(10pM)2 μl     Taq

酶 (2U/μl)1 μl     DNA

模板(50ng-1μg/μl

1 μl加ddH2O至 50 μl

PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。

2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93 40s → 58 30s → 72 60s,循環(huán)30-35次,在72 保7min。

3:伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

定量PCR方法:

a、競(jìng)爭(zhēng)法  產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板。在同一反應(yīng)管中,待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增(其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,而待測(cè)模板不被酶切,可通過(guò)電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開(kāi),分別測(cè)定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)。

b、內(nèi)參照法

在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長(zhǎng)度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開(kāi)來(lái),分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度,以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板。

c、PCR-ELISA法

利用di高辛等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗di高辛酶標(biāo)抗體-辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCRELISA法只是定性實(shí)驗(yàn),若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的。操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4。

2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。

4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

6.每孔加入底物A、B各50μL,37避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

下列是公司正在銷售的產(chǎn)品:

二氫二醇脫氫酶2(DDH2)重組蛋白

醛糖還原酶相似蛋白1(ARL1)重組蛋白

蛋白酶23(PRSS23)重組蛋白

核糖核酸酶A10(RNASE10)重組蛋白

肽酶抑制因子16(PI16)重組蛋白

環(huán)氧化合物水解酶4(EPHX4)重組蛋白

輔酶Q10同源物B(COQ10B)重組蛋白

羧酸酯酶5A(CES5A)重組蛋白

脫羧酶樣蛋白1(GADL1)重組蛋白

透明質(zhì)酸氨基葡糖苷酶1(HYAL1)重組蛋白

絲蛋白酶33(PRSS33)重組蛋白

二氫二醇脫氫酶2(DDH2)重組蛋白 物種:Homo sapiens (Human,人)

醛糖還原酶相似蛋白1(ARL1)重組蛋白 物種:Homo sapiens (Human,人)

蛋白酶23(PRSS23)重組蛋白 物種:Homo sapiens (Human,人)

核糖核酸酶A10(RNASE10)重組蛋白 物種:Homo sapiens (Human,人)

肽酶抑制因子16(PI16)重組蛋白 物種:Homo sapiens (Human,人)

環(huán)氧化合物水解酶4(EPHX4)重組蛋白 物種:Mus musculus (Mouse,小鼠)

輔酶Q10同源物B(COQ10B)重組蛋白 物種:Homo sapiens (Human,人)

羧酸酯酶5A(CES5A)重組蛋白 物種:Homo sapiens (Human,人)

脫羧酶樣蛋白1(GADL1)重組蛋白 物種:Homo sapiens (Human,人)

透明質(zhì)酸氨基葡糖苷酶1(HYAL1)重組蛋白 物種:Homo sapiens (Human,人)

蛋白酶33(PRSS33)重組蛋白 物種:Homo sapiens (Human,人)

RIO激酶1(RIOK1)重組蛋白 物種:Homo sapiens (Human,人)

NADH脫氫酶5(ND5)重組蛋白 物種:Homo sapiens (Human,人)

核糖核酸酶A12(RNASE12)重組蛋白 物種:Homo sapiens (Human,人)

血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)重組蛋白 物種:Bos taurus; Bovine (Cattle,牛)

血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)重組蛋白 物種:Homo sapiens (Human,人)

血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)重組蛋白 物種:Mus musculus (Mouse,小鼠)

血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)重組蛋白 物種:Sus scrofa; Porcine (Pig,豬)

血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)重組蛋白 物種:Rattus norvegicus (Rat,大鼠)

血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)重組蛋白 物種:Oryctolagus cuniculus (Rabbit,兔)

腦膜瘤表達(dá)抗原5(MGEA5)重組蛋白 物種:Homo sapiens (Human,人)

腦膜瘤表達(dá)抗原5(MGEA5)重組蛋白 物種:Mus musculus (Mouse,小鼠)

腦膜瘤表達(dá)抗原5(MGEA5)重組蛋白 物種:Rattus norvegicus (Rat,大鼠)

基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP13)重組蛋白 物種:Bos taurus; Bovine (Cattle,牛)

基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP13)重組蛋白 物種:Canis familiaris; Canine (Dog,犬)

基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP13)重組蛋白 物種:Capra hircus; Caprine (Goat,山羊)

PCR檢測(cè)試劑盒基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP13)重組蛋白 物種:Equus caballus; Equine (Horse,馬)

基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP13)重組蛋白 物種:Chicken (Gallus,雞)

基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP13)重組蛋白 物種:Homo sapiens (Human,人)


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