實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性定量方法，已得到，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

操作流程
收集基因信息——>設計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測序——>測序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質(zhì)粒實物保存。

下列相關產(chǎn)品：
霍亂弧菌型PCR檢測試劑盒

霍亂弧菌熒光PCR檢測試劑盒

雞白痢沙門氏菌PCR檢測試劑盒

雞敗血支原體PCR檢測試劑盒

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl     引物1（10pM）
2 μl     引物2（10pM）
2 μl     Taq酶 （2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl      加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

定量PCR方法：
a、競爭法　　產(chǎn)品僅用于科研實驗
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物，內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合，再加入抗di高辛酶標抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。

操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

下列是公司正在銷售的產(chǎn)品：
4,4'-Dimethoxytrityl chloride  40615-36-9  中文名：4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷  分子式：C21H19ClO2  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠去甲上腺素   英文名稱：   Mouse Nor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   NADR

4,4'-Diaminodiphenylsulfone  80-08-0  中文名：4,4'-二氨基二苯砜  分子式：C12H12N2O2S  度：98.0%      小鼠非肌性肌球蛋白重鏈9   英文名稱：   nonMyosin Heavy Chain 9   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   nonMYH9hc

4,4'-Cyclohexylidenebisphenol  843-55-0  中文名：4,4'-環(huán)亞己基雙  分子式：C18H20O2  度：98.0%      小鼠巨噬細胞來源的趨化因子(mouse MDC)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

4,4'-Bis(diethylamino)benzophenone  90-93-7  中文名：四乙基米氏酮  分子式：C21H28N2O  度：98.0%      小鼠髓過氧化物酶(mouse MPO)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

4,4'-Bis(5-methyl-2-benzoxazolyl)stilbene  2397-00-4  中文名：4,4'-雙(5--2-苯并惡唑基)芪  分子式：C30H22N2O2  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠粘蛋白(mouse MUC5AC)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

1019206-88-2  Regorafenib monohydrate  50mg  Lignum dalbergiae odoriferae降香染料法PCR鑒定試劑盒 

101932-71-2  Calyculin A  100μg  Rhizoma curcumae longae姜黃染料法PCR鑒定試劑盒 

1019331-10-2  S0859  10mg  Caulis spatholobi雞血藤染料法PCR鑒定試劑盒 

1019331-10-2  S0859  50mg  Fructus tribuli蒺藜染料法PCR鑒定試劑盒 

1019331-10-2  S0859  5mg  Caulis spatholobi雞血藤染料法PCR鑒定試劑盒
鸚鵡喙羽病病毒PCR檢測試劑盒139592-37-3  (Fmoc-Cys-OtBu)2  5g  Radix polygoni multiflori preparata制何首烏探針法PCR鑒定試劑盒 

478188-26-0  Ac-Gly-Asp-Tyr-Ser-His-Cys-Ser-Pro-Leu-Arg-Tyr-Tyr-Pro-Trp-Trp-Lys-Cys-Thr-Tyr-Pro-Asp-Pro-Glu-Gly-Gly-Gly-NH2  0.5mg  Radix polygoni multiflori preparata制何首烏探針法PCR鑒定試劑盒 

478188-26-0  Ac-Gly-Asp-Tyr-Ser-His-Cys-Ser-Pro-Leu-Arg-Tyr-Tyr-Pro-Trp-Trp-Lys-Cys-Thr-Tyr-Pro-Asp-Pro-Glu-Gly-Gly-Gly-NH2  1mg  Radix glycyrrhizae preparata灸甘草探針法PCR鑒定試劑盒 

29268-00-6  FA-Ala-Phe-NH2  250mg  Radix glycyrrhizae preparata灸甘草探針法PCR鑒定試劑盒 

29268-00-6  FA-Ala-Phe-NH2  1g  Radix aconiti preparata制川烏探針法PCR鑒定試劑盒