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產氣莢膜梭狀芽孢桿菌型PCR檢測試劑盒

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更新時間:2023-03-06 08:33:00瀏覽次數(shù):175

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產品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T
應用領域 化工 主要用途 僅供科研實驗
英文名稱 Clostridium perfringens types AAPCR 規(guī)格 50T
產氣莢膜梭狀芽孢桿菌型PCR檢測試劑盒公司正在銷售的產品:牛結核分歧桿菌(MB)核酸檢測試劑盒
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詳細介紹

操作流程
收集基因信息——>設計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產物 ——> 用感受態(tài)細胞做轉化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質粒抽提——>質粒測序——>測序結果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質粒實物保存。

產品名稱

英文名稱

規(guī)格

產氣莢膜梭狀芽孢桿菌型PCR檢測試劑盒

Clostridium perfringens types AAPCR

50T

4.png


PCR實驗方法步驟:
方法
1
:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix
2mM
4 μl    
引物110pM
2 μl    
引物210pM
2 μl     Taq
酶 (2U/μl
1 μl     DNA
模板(50ng-1μg/μl
1 μl      
ddH2O 50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2
:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93
預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93 40s → 58 30s → 72 60s,循環(huán)30-35次,在727min
3
:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產物放置于4
待電泳檢測或-20長期保存。
4
PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
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實時熒光定量PCR
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的:
1
Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進入真正的指數(shù)擴增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。
2
Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,重現(xiàn)性定量方法,已得到,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產物分開,分別測定熒光強度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b
、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內標也被擴增。在PCR產物中,由于內標與靶模板的長度不同,二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內標為對照定量待檢測模板。
c
、PCRELISA
利用di高辛等標記引物,擴增產物被固相板上特異的探針所結合,再加入抗di高辛酶標抗體-辣根過氧化物酶結合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCRELISA法只是定性實驗,若加入內標,作出標準曲線,也可實現(xiàn)定量檢測目的。
下列是公司正在銷售的產品:
FoxP1(Forkhead box P1) FoxP1(T細胞轉錄因子)抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg

CCNA1 Cyclin A1 / CCNA1 鼠單抗 (PE) Human

Rhesus antibody Rh phospho-Dnmt1(Ser154) 0酸化DNA甲基轉移酶1抗體 規(guī)格 0.1ml

雜交袋(15×25cm) 100/包 國產

ZFYVE27 英文名稱: 鋅指FYVE結構域蛋白27抗體 0.2ml

DIAPH2 英文名稱: DIAPH2蛋白抗體 0.2ml

CCNA1 Cyclin A1 / CCNA1 鼠單抗 (PE) Human

phospho-14-3-3 protein zeta + delta (Ser58) 0酸化14-3-3 α/β/ζ抗體 0.1ml

phospho-E2F1 (Ser337) 0酸化轉錄因子E2F-1抗體 0.1ml

神經再生相關蛋白抗體 Anti-P311 protein 0.1ml

Anti-SP /FITC 熒光素標記P物質抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-NFKBIA(Tyr305) 0酸化IKB alpha抗體 規(guī)格 0.1ml

Cytomegalovirus (CMV)PP65 細胞巨化病毒(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
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小鼠甲狀腺素抗體(TAb)ELISA檢測試劑盒MouseThyroxineaibody,TAbELISAKit 96T/48T

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操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4。
2.
設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3.
樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4.
除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37
水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.
棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6.
每孔加入底物A、B50μL37
避光孵育15min。產品僅用于科研實驗
7.
每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

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