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阪崎腸桿菌PCR檢測(cè)試劑盒

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更新時(shí)間:2023-03-06 09:49:56瀏覽次數(shù):147

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T
應(yīng)用領(lǐng)域 化工 主要用途 僅供科研實(shí)驗(yàn)
英文名稱(chēng) Enterobacter sakazakiPCR 規(guī)格 50T
阪崎腸桿菌PCR檢測(cè)試劑盒公司正在銷(xiāo)售的產(chǎn)品:山羊關(guān)節(jié)炎R(shí)T-腦脊髓炎病毒探針?lè)晒舛縋CR試劑盒(同)
山羊皰疹病毒1型探針?lè)晒舛縋CR試劑盒
山羊皰疹病毒2型探針?lè)晒舛縋CR試劑盒
山羊皰疹病毒通用探針?lè)晒舛縋CR試劑盒

犬流感病毒32型探針?lè)晒舛縋CR試劑盒

詳細(xì)介紹

實(shí)時(shí)熒光定量PCR
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限,實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度,并記錄在電腦軟件之中,通過(guò)對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR無(wú)需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的:
1
Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí),剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期(對(duì)數(shù)期),此時(shí)微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性,即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增,得到的Ct值是恒定的。
2
Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測(cè)定,因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴(lài)的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,重現(xiàn)性定量方法,已得到,廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測(cè)等諸多領(lǐng)域。

4.png


操作流程
收集基因信息——>設(shè)計(jì)引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細(xì)胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽(yáng)性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測(cè)序——>測(cè)序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫(kù)——>質(zhì)粒實(shí)物保存。

產(chǎn)品名稱(chēng)

英文名稱(chēng)

規(guī)格

阪崎腸桿菌PCR檢測(cè)試劑盒

Enterobacter sakazakiPCR

50T

下列相關(guān)產(chǎn)品:
血紅鏈球菌PCR檢測(cè)試劑盒

血清型耶爾森氏菌ail基因常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒

血球鏈菌PCR檢測(cè)試劑盒

血吸蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1
:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix
2mM
4 μl    
引物110pM
2 μl    
引物210pM
2 μl     Taq
酶 (2U/μl
1 μl     DNA
模板(50ng-1μg/μl
1 μl      
ddH2O 50 μl
PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2
:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93
預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93 40s → 58 30s → 72 60s,循環(huán)30-35次,在727min
3
:伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛?span>PCR
試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4待電泳檢測(cè)或-20長(zhǎng)期保存。
4
PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

定量PCR方法:
a、競(jìng)爭(zhēng)法  產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板。在同一反應(yīng)管中,待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增(其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,而待測(cè)模板不被酶切,可通過(guò)電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開(kāi),分別測(cè)定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)。
b
、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長(zhǎng)度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開(kāi)來(lái),分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度,以?xún)?nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板。
c
PCRELISA
利用di高辛等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗di高辛酶標(biāo)抗體-辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCRELISA法只是定性實(shí)驗(yàn),若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的。

操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4
2.
設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL
3.
樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。
4.
除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37
水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.
棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6.
每孔加入底物A、B50μL37
避光孵育15min。
7.
每孔加入終止液50μL15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

下列是公司正在銷(xiāo)售的產(chǎn)品:
NIT2 (nitrilase family, member 2) NIT2蛋白抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg

Anti-Apollon/BIRC6 Apollon凋亡抑制蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-ATR/ACTR(Ser428) 0酸化ATR抗體 規(guī)格 0.1ml

山羊抗小鼠 IgG(H+L)/AP 0.1ml 美國(guó)Jackson公司分裝

VSV-G tag 英文名稱(chēng): VSV-G tag標(biāo)簽抗體 0.1ml

DLST 英文名稱(chēng): DLST蛋白抗體 0.2ml

Anti-Apollon/BIRC6 Apollon凋亡抑制蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

SARP1: 分泌細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml

ESRP2: 上皮粘連調(diào)控蛋白ESRP2抗體 0.2ml

轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體 Anti-CD71/TFR 0.1ml

Anti-HSP-70/RBITC 羅丹明標(biāo)記熱休克蛋白-70抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-GATA1(ser142) 0酸化珠蛋白轉(zhuǎn)錄因子1抗體 規(guī)格 0.1ml

CG6856-PA peptide CG6856-PA抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
阪崎腸桿菌PCR檢測(cè)試劑盒小鼠載脂蛋白A1(APOA1)ELISA試劑盒 ,英文名: APOA1 ELISA Kit

猴γ干擾素(IFN-γ)ELISA檢測(cè)試劑盒MonkeyIerferonγ,IFN-γELISAKit 96T/48T

犬基質(zhì)金屬9/明膠酶B(MMP-9/Gelatinase B)免疫試劑盒 Dog maix metalloproteinase 9/Gelatinase B,MMP-9 ELISA Kit

英文名稱(chēng)HumanVascuolarcelladhesionmolecule1ELISAkit人血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1)ELISAkit規(guī)格:96T/48T

化線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測(cè)定試劑盒100

Ratiercellularadhesionmolecule3,ICAM-3ELISA試劑盒大鼠細(xì)胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T


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