詳細(xì)介紹
我的胎牛血清中含有絮狀沉淀,會對細(xì)胞培養(yǎng)有影響嗎,如何去除?
Moregate FBSF-500澳洲血清用于細(xì)胞培養(yǎng)的胎牛血清以及其它血清中可能會存在以下種類的沉淀物:
1. 纖維蛋白,它是經(jīng)常出現(xiàn)的較大的沉淀物,可以達到1 -2mm,可以用肉眼觀察到。因為血清都是在低 溫下進行收集和快速處理的,一些纖維蛋白原(可溶性的形成絮狀纖維蛋白的前體)在處理過程中仍然處 于溶解狀態(tài),而當(dāng)經(jīng)過最后的過濾分裝后,就會在瓶中凝結(jié)出現(xiàn)纖維蛋白沉淀。
2. 磷酸鈣,它也是常見的一種沉淀物,通常會使血清出現(xiàn)渾濁,并且在37P培養(yǎng)的時候會増加。這種沉淀 物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點,這些小黑點由于布朗運動看上去可以活動,因此經(jīng)常被誤認(rèn)為是微生 物污染。
3. 膽固醇、脂肪酸酯以及一些不溶性脂蛋白質(zhì)。它們也是血清中出現(xiàn)沉淀物的常見原因之一。
通常以上這些沉淀物不會影響血清的品質(zhì),如果您希望除去這些沉淀物,可以將血清轉(zhuǎn)移到無菌離心管 內(nèi),以400g進行離心,高心后將上清液加入預(yù)過濾培養(yǎng)基直接使用即可。我們不建議您以過濾的方法除去 這些絮狀沉淀物,因為它們可能會阻塞您的過濾膜。
怎樣解凍胎牛血清以保證其品質(zhì)不受影響?
我們建議您首先將冷凍室里取出來的血清放進冷藏室,在2-8P的條件下放置12-24小時使之部分溶解, 然后將其取出置于室溫下全部解凍。解凍后的血清因立即使用,如不使用應(yīng)分裝后冷凍保存,在分裝之前, 應(yīng)充分混勻血清。
注意:不要將胎牛血清在37P條件下放置過久。在此條件下,血清可能會變渾濁,而且由于血清中的某些 組分對溫度比較敏感,其性能也可能受到影響。
如果我拿到的胎牛血清已經(jīng)部分解凍,還可以使用嗎?
所有Moregate胎牛血清在運輸?shù)倪^程中都保存在干冰里,因此您應(yīng)該得到冰凍的產(chǎn)品。如果血清部分解 凍,可以繼續(xù)使用,應(yīng)待其*解凍后馬上使用或分裝后冷凍保存。
什么是熱滅活,為何要熱滅活,具體如何操作?
熱滅活是指以56P, 30分鐘水浴處理已經(jīng)解凍的血清,使血清中的補體滅活。
基于補體的熱敏感性,加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與補體介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(complement dependent cytotoxicity, CDC ) o CDC可導(dǎo)致溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,刺激細(xì)胞和血小板釋放組 胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。
Moregate FBSF-500澳洲血清具體操作上,應(yīng)準(zhǔn)備一個和血清瓶同等大小裝滿水的塑料瓶,在塑料瓶中插一支溫度計,與血清一起放置在 水浴鍋中,待溫度計溫度達到56P后開始計時,30分鐘后立即取出血清使用或分裝。
注意:不宜將血清在更高的溫度下放置更長的時間,否則可能導(dǎo)致血清中的蛋白質(zhì)發(fā)生變性,從而影響產(chǎn)品 的性能。
y-射線的照射對血清有什么重要性?
y-射線可以有效打斷微生物的DNA和RNA,從而使動物原性成分中的細(xì)菌、病毒和支原體失活。一般使用 射線對動物血液產(chǎn)品進行照射時,其照射計量不得低于25kGyo已經(jīng)證實射線對病毒的滅活可達6-8個對數(shù) 值,而對支原體則是6-7之間。而當(dāng)照射計量在25-45kGy之間時,血清的理化性質(zhì)和細(xì)胞培養(yǎng)性能都不會 發(fā)生改變。