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XL1-Blue MRF`Kan Chemically Competent Cell      保存條件：-80℃

基因型：

?(mcrA)183 ?(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1recA1 gyrA96 relA1 lac [F′proAB lacIqZ?M15 Tn5 (KanR)

簡(jiǎn)要說明：

XL1-Blue MRF’Kan 菌株來源于 XL1-Blue 株系，是限制酶系統(tǒng)缺失型[? (mcrA)183, ? (mcrCB-hsdSMR -mrr)173],且具有KA那霉素抗性 (Kanr )，可轉(zhuǎn)化具有l(wèi)u霉素或四環(huán)素抗性的質(zhì)粒。recA1 和 endA1 的突變 有利于插入 DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒 DNA 的提取。hsdR17 突變導(dǎo)致 EcoK 核酸內(nèi)切酶系統(tǒng)缺失，增強(qiáng)了 外源 DNA 的穩(wěn)定性和提取質(zhì)量。lacI q ZΔM15 的存在使 XL1-Blue MRF’Kan 菌株可用于藍(lán)、白斑篩選。 XL1-Blue MRF’Kan 感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>108 cfu/μg DNA。

操作說明：

1.XL1-Blue MRF’Kan 感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌塊融化，加入目的 DNA 并用 手打 EP 管底充分混勻，冰中靜置 25 分鐘。

2.42℃水浴熱激 45 秒，迅速放回冰上并靜置 2 分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3.向離心管中加入 700 μl 不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT 或LB)，混勻后 37℃，200 rpm 復(fù)蘇 60 分鐘。

4.5000 rpm離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的 2YT 或 LB 培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于 37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

1.感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化，插入冰中 8 分鐘內(nèi)加入目標(biāo) DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存 放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

2.XL1-Blue MRF’Kan 感受態(tài)細(xì)胞具有KA 那霉素抗性，不可轉(zhuǎn)化具有KA 那霉素抗性的質(zhì)粒。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。