目錄:合肥恩派爾貿(mào)易有限公司>>Abnbio感受態(tài)細(xì)胞>>克隆感受態(tài)細(xì)胞 非電擊>> EPI300Chemically Competent Cell克隆感受態(tài)細(xì)胞
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更新時(shí)間：2024-03-21 14:59:28瀏覽次數(shù)：287評(píng)價(jià)
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50支100ul |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | ABG025-50 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
| 主要用途 | 細(xì)胞培養(yǎng) |
EPI300 Chemically Competent Cell
基因型：
F – mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ?M15?lacX74 recA1 endA1 araD139 ?(ara,leu)7697 galU galK λ–rpsL nupG trfA dhfr。
簡(jiǎn)要說(shuō)明：
EPI300細(xì)胞含有一個(gè)突變的trfA基因，該基因表達(dá)出的蛋白產(chǎn)物可以促進(jìn)含有ori V復(fù)制子的質(zhì)粒的高拷貝擴(kuò)繁，誘導(dǎo)劑Ⅰ可以誘導(dǎo)trfA基因的表達(dá)。當(dāng)含有ori V復(fù)制子質(zhì)粒的EPI300細(xì)胞在LB/2YT或SOB培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí)，trfA基因的表達(dá)被抑制，ori V復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)維持在很低的水平；當(dāng)在培養(yǎng)基中加入誘導(dǎo)劑Ⅰ，ori V復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)可維持在很高的水平，提高了質(zhì)粒產(chǎn)量。因此EPI300菌株可以降低ori V復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)，特別適合于各種不穩(wěn)定 DNA 或毒性基因的克隆。 [mrr-hsdRMS-mcrBC]基因型使EPI300菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA（例如：哺乳動(dòng)物基因組DNA）。
recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。lacZΔM15 標(biāo)記的存在使EPI300可用于藍(lán)白斑篩選，rpsL賦予其lian霉素抗性。EPI300感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)3×108cfu/μg DNA
操作說(shuō)明：
1.EPI300感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手bo打EP管底混勻，冰中靜置25分鐘。
2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3.向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌2YT或LB培養(yǎng)基，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4.5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15 h。
注意事項(xiàng)：
1.感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2.混入目的DNA時(shí)，應(yīng)輕柔操作。
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