目錄:合肥恩派爾貿(mào)易有限公司>>Abnbio感受態(tài)細(xì)胞>>表達(dá) 感受態(tài)細(xì)胞>> ABG202-50BL21(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞
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更新時(shí)間：2024-03-25 10:01:48瀏覽次數(shù)：296評(píng)價(jià)
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50X100ul |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | ABG202-50 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,食品/農(nóng)產(chǎn)品,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | 感受態(tài)細(xì)胞 |
基因型
F- ompT hsdS(rB-mB-) gal dcm(DE3)pLysS Camr
簡(jiǎn)要說(shuō)明
BL21(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞攜帶pLysS質(zhì)粒，具有氯mei素抗性。pLysS含有表達(dá)T7 溶jun酶的基因，T7溶jun酶可以作用于大腸桿菌細(xì)胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌，能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平，但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達(dá)，適合表達(dá)毒性蛋白和非毒性蛋白。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū)（DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶），BL21(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率高達(dá)108cfu/μg。
操作說(shuō)明
取100μl冰上融化的BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞，加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。
2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌2YT或LB培養(yǎng)基，混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘
4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含34 µg/ml氯mei素及所選質(zhì)粒篩選抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。
注意事項(xiàng)
感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。
2.混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。
4.誘導(dǎo)時(shí)，IPTG濃度可選（0.1-2mM均可）
5.為獲得需要量的蛋白，最佳誘導(dǎo)時(shí)間，溫度，IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。
6.BL21(DE3)pLysS 菌株攜帶pLysS質(zhì)粒，除復(fù)蘇培養(yǎng)基為無(wú)抗生素外，其余所用培養(yǎng)基、培養(yǎng)液均應(yīng)含有34µg/ml氯mei素，以防質(zhì)粒丟失。
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