目錄:合肥恩派爾貿(mào)易有限公司>>Abnbio感受態(tài)細(xì)胞>>表達(dá) 感受態(tài)細(xì)胞>> ABG208-50B834(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞
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更新時(shí)間：2024-03-25 15:02:58瀏覽次數(shù)：287評(píng)價(jià)
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50X100ul |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | ABG208-50 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,食品/農(nóng)產(chǎn)品,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | 感受態(tài)細(xì)胞 |
基因型
F-ompT hsdSB(rB-mB-) galdcm met(DE3)
簡要說明
B834 是 BL21 菌株的父系菌株。該系列宿主菌是蛋氨酸缺陷型，可以用來高水平，高特異性的使用35S-蛋氨酸和硒代蛋氨酸標(biāo)記目的蛋白，進(jìn)行蛋白質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)研究。B834宿主菌也是 lon 和 ompT 蛋白酶缺陷型菌株。DE3 是溶源性的λDE3, 所以帶有T7RNA 聚合酶的染色體拷貝。該菌株適用于 pET 系列載體，及其他T7 啟動(dòng)子系列載體。
操作說明
1、取 100μl 冰上融化的B834（DE3）感受態(tài)細(xì)胞，加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻，冰上靜置25 分鐘。
2. 42℃水浴熱激 45 秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入 700μl 不含抗生素的無菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后 37℃，200rpm 復(fù)蘇60 分鐘。
4. 5000rpm 離心一分鐘收菌，留取100μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT 或LB培養(yǎng)基上。
5. 將平板倒置放于 37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。
注意事項(xiàng)
1、感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。
2. 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。
4. 誘導(dǎo)時(shí)，IPTG 濃度可選（0.1-40mM 均可）。
5. 為獲得需要量的蛋白，最佳誘導(dǎo)時(shí)間，溫度，IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。
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