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抑菌圈的實(shí)驗(yàn)步驟一共能分成幾步
抑菌圈是福萊明發(fā)現(xiàn)青霉素的過(guò)程中，提出的一個(gè)詞匯。青霉的培養(yǎng)皿的周?chē)且粋€(gè)以青霉菌落為圓心的一個(gè)規(guī)則的圓，不生長(zhǎng)細(xì)菌,而在遠(yuǎn)離青霉的地方有細(xì)菌生長(zhǎng)。不生長(zhǎng)細(xì)菌的地方，這個(gè)圓圈被福萊明稱為抑菌圈。
抑菌圈實(shí)驗(yàn)說(shuō)明
抑菌圈法是衡量殺菌防霉劑效果的一種方式，主要用于測(cè)定殺菌防霉劑對(duì)細(xì)菌、霉菌、酵母菌的抑菌作用，是定性或半定量的方法。通過(guò)殺菌防霉劑在瓊脂平板上的擴(kuò)散能力來(lái)初步篩選更有效的殺菌防霉劑品種。
用具和材料
霉菌培養(yǎng)皿，無(wú)菌吸管(或針筒)，圓片濾紙(直徑50px)，帶玻璃珠的無(wú)菌水，帶過(guò)濾漏斗的三角牌，鑷子，接種針(環(huán))，熔化狀態(tài)的瓊脂培養(yǎng)基(最好保溫于45℃左右水浴中)，一定濃度的藥劑，供試驗(yàn)用的菌種。
試驗(yàn)過(guò)程
1. 用接種環(huán)挑取各試管斜面的菌種于帶玻璃珠的無(wú)菌水中，用手振蕩數(shù)分鐘使孢子分散，過(guò)濾后制成混合孢子懸液。
2. 用無(wú)菌吸管(或針筒)向各培養(yǎng)皿中注入一定濃度的混合孢子懸浮液0.5mL。
3. 向各培養(yǎng)皿內(nèi)注入15Ml~20ml的熔化狀瓊脂培養(yǎng)基(約45℃)，將菌液與培養(yǎng)基混合均勻，待其冷卻。
4. 用鑷子將圓片濾紙?jiān)诓煌瑵舛鹊姆烂箘┲薪n片刻，取出置于帶菌培養(yǎng)基平板的中央，蓋上蓋子
5. 置適宜溫度下，培養(yǎng)2~3d，觀察濾紙片圓片周?chē)志Φ挠袩o(wú)及大小。
注意事項(xiàng)
1. 所有的操作用具和材料都要事先做滅菌處理，操作必須在無(wú)菌室(或無(wú)菌箱)內(nèi)于火焰旁進(jìn)行。
2. 霉菌、細(xì)菌、酵母菌等各種微生物都必須分別配置混合菌液，即這里指的混合菌液是霉菌或酵母菌等諸種菌的分別混合液，并非霉菌、細(xì)菌和酵母菌的混合液。
3、 混合菌液的濃度一般為106~108cfu/mL.
4. 倒入培養(yǎng)皿的瓊脂培養(yǎng)基溫度不能太高(一般為45℃左右)，否則會(huì)引起微生物死亡。也不能太低，因?yàn)榄傊瑫?huì)很快凝結(jié)，以致攪拌不均勻，影響試驗(yàn)結(jié)果。
5. 各種微生物的最適生長(zhǎng)溫度不同(例如霉菌一般為25~30℃，細(xì)菌一般為32~37℃等)，恒溫培養(yǎng)時(shí)宜分開(kāi)放置。
結(jié)果評(píng)判
由于濾紙圓片所吸附的藥液慢慢向四周擴(kuò)散，因此在濾紙片的周?chē)统霈F(xiàn)清晰的抑菌圈(加入該防霉劑對(duì)供試菌有抑制效果)。抑菌圈的大小代表藥劑抗菌力的高低。在一定的藥劑濃度范圍內(nèi)，藥劑的濃度越高則抑菌圈的直徑越大。此法同樣適合于測(cè)定單個(gè)菌的抗菌效果。