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激光聚焦顯微鏡的原理

閱讀:666      發(fā)布時(shí)間:2017-11-11
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 激光聚焦顯微鏡是一種高分辨率的顯微成像技術(shù)。普通的熒光光學(xué)顯微鏡在對(duì)較厚的標(biāo)本(例如細(xì)胞)進(jìn)行觀察時(shí),來(lái)自觀察點(diǎn)鄰近區(qū)域的熒光會(huì)對(duì)結(jié)構(gòu)的分辨率形成較大的干擾。共聚焦顯微技術(shù)的關(guān)鍵點(diǎn)在于,每次只對(duì)空間上的一個(gè)點(diǎn)(焦點(diǎn))進(jìn)行成像,再通過(guò)計(jì)算機(jī)控制的一點(diǎn)一點(diǎn)的掃描形成標(biāo)本的二維或者三維圖象。在此過(guò)程中,來(lái)自焦點(diǎn)以外的光信號(hào)不會(huì)對(duì)圖像形成干擾,從而大大提高了顯微圖象的清晰度和細(xì)節(jié)分辨能力。是一種利用計(jì)算機(jī)、激光和圖像處理技術(shù)獲得生物樣品三維數(shù)據(jù)、目前的分子細(xì)胞生物學(xué)的分析儀器。主要用于觀察活細(xì)胞結(jié)構(gòu)及特定分子、離子的生物學(xué)變化,定量分析,以及實(shí)時(shí)定量測(cè)定等。
激光共聚焦顯微鏡已經(jīng)發(fā)展為一種結(jié)合了激光技術(shù),顯微光學(xué),自動(dòng)控制和圖像處理等多種科研成果的高技術(shù)工具。是現(xiàn)代微觀研究領(lǐng)域*的利器之一。激光掃描共聚焦顯微鏡的基本工作原理是首先由激光器發(fā)射的一定波長(zhǎng)的激發(fā)光,光線經(jīng)放大后通過(guò)掃描器內(nèi)的照明針孔光欄形成點(diǎn)光源,由物鏡聚焦于樣品的焦平面上,樣品上相應(yīng)的被照射點(diǎn)受激發(fā)而發(fā)射出的熒光,通過(guò)檢測(cè)孔光欄后,到達(dá)檢測(cè)器,并成像于計(jì)算機(jī)監(jiān)視屏上。這樣由焦平面上樣品的的每一點(diǎn)的熒光圖像組成了一幅完整的共焦圖像,稱為光切片。

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