精品国产亚洲国产亚洲,久热中文在线观看精品视频,成人三级av黄色按摩,亚洲AV无码乱码国产麻豆

上海研謹生物科技有限公司

線粒體復(fù)合體Ⅳ試劑盒說明書

時間:2019-2-26閱讀:1426
分享:

貨號:YJ1172                                            規(guī)格:100管/96樣

線粒體復(fù)合體Ⅳ試劑盒說明書

微量法

正式測定前務(wù)必取 2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義:

線粒體復(fù)合體Ⅳ又稱細胞色素C氧化酶,也是線粒體呼吸電子傳遞鏈主路和支路的共有成分,負責(zé)催化還原型細胞色素C的氧化,并終把電子傳遞給氧,生成水。

測定原理:

還原型細胞色素C在550nm有特征光吸收,線粒體復(fù)合體Ⅳ催化還原型細胞色素C生成氧化型細胞色素C,因此550nm光吸收下降速率能夠反映線粒體復(fù)合體Ⅳ酶活性。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

試劑一:液體 100mL×1 瓶,-20℃保存;

試劑二:液體 20mL×1 瓶,-20℃保存;

試劑三:液體 1.5mL×1 瓶,-20℃保存;

試劑四:液體 20mL×1 瓶,4℃保存;

試劑五:粉劑×1 支,-20℃保存;

試劑六:粉劑×1 支,-20℃保存;

樣本的前處理:

組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

1、準確稱取0.1g組織或收集500萬細胞,加入1mL試劑一和10uL試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

2、將勻漿 600g,4℃離心 5min。

3、棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11100g,4℃離心 10min。

4、上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白,可用于測定從線粒體泄漏的復(fù)合體Ⅳ(此步可選做)。

5、步驟④中的沉淀即為線粒體,加入200uL試劑二和2uL試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10秒,重復(fù)30次),用于復(fù)合體Ⅳ酶活性測定。

測定步驟:

1、分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至550nm,蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測定

(1)工作液的配制:臨用前將試劑五和試劑六依次轉(zhuǎn)移到試劑四中混合溶解,置于37℃(哺

乳動物)或 25℃(其它物種)孵育5min;用不完的試劑 4℃可保存一周;

(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本和200μL工作液,混勻,立即記錄550nm

處初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2,計算 ΔA=A1-A2。

注意點: 若 ΔA 大于0.2,需將樣本用試劑二稀釋適當(dāng)倍數(shù)(計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)),

使 A1-A2 小于 0.2,可提高檢測靈敏度。

復(fù)合體Ⅳ活力單位的計算:

a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下:

(1) 按樣本蛋白濃度計算

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化降解1nmol還原型細胞色素C定義為一個酶活力單位。

復(fù)合體Ⅳ活力(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T

=1099×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。

(2) 按樣本鮮重計算

單位的定義:每g組織每分鐘催化降解1nmol還原型細胞色素C定義為一個酶活力單位。

復(fù)合體Ⅳ活力 (nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d )×109]÷(W×V樣÷V樣總)÷T=222×ΔA÷W

(3) 按細菌或細胞密度計算

單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘催化降解1nmol還原型細胞色素C定義為一個酶活力單位。

復(fù)合體Ⅳ活力(nmol/min/104cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.444×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,2.1×10 -4 L;ε:細胞色素 C 摩爾消光系數(shù),1.91×104 L/ mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.01 mL;V 樣總:加入提取液體積,0.202 mL;T:反應(yīng)時間,1 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細胞或細菌總數(shù),500 萬。

b.使用 96 孔板測定的計算公式如下:

(1) 按樣本蛋白濃度計算

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化降解1nmol還原型細胞色素C定義為一個酶活力單位。

復(fù)合體Ⅳ活力(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T

=2198×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。

(2) 按樣本鮮重計算

單位的定義:每g組織每分鐘催化降解1nmol還原型細胞色素C定義為一個酶活力單位。

復(fù)合體Ⅳ活力 (nmol/min/g 鮮重 )=[ΔA×V反總÷(ε×d )×109]÷(W×V樣 ÷V樣總)÷T=444×ΔA÷W

(3) 按細菌或細胞密度計算

單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘催化降解1nmol還原型細胞色素C定義為一個酶活力單位。

復(fù)合體Ⅳ活力(nmol/min/104cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.888×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,2.1×10 -4 L;ε:細胞色素 C 摩爾消光系數(shù),1.91×104 L/mol/cm;d:96 孔板光徑,0.5cm;V 樣:加入樣本體積,0.01 mL;V 樣總:加入提取液體積,0.202mL;T:反應(yīng)時間,1 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細胞或細菌總數(shù),500 萬。

姬姆薩染色液說明書

萊克多巴胺快速檢測試劑盒說明書

人肝癌細胞(Mahlavu)培養(yǎng)說明書

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復(fù)您~

以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實性、準確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負責(zé),化工儀器網(wǎng)對此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。

溫馨提示:為規(guī)避購買風(fēng)險,建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。

撥打電話
在線留言
日韩亚洲欧美综合在线-成人在线网站在线观看| 亚洲av乱码一区二区-九九免费在线观看视频| 一区二区三区国产高清mm-美女张开腿让帅哥桶爽| 日本女优一卡二卡在线观看-欧美大胆a级视频秒播| 国产美女网站在线观看-国产精品亚洲综合网69| 亚洲视频一区二区三区免费-国产一级黄色大片在线| 久久99国产综合精品女人-日韩一区二区三区在线不卡| 亚洲av乱码一区二区-九九免费在线观看视频| 久久精品亚洲无中文东京热-日本妹子内谢视频一区| 欧美伦乱淫老妇女激情吧-亚洲女邻居精品二区久久| 国产一区二区三区噜噜-精品久久亚洲一区二区欧美| 久久99热这里都是精品啊-国产成人亚洲精品无码aV| 99精品只有久久精品免费-蜜臀一区二区三区精品久久久| 亚洲欧美日韩国产一区二区三区-国产欧美日韩一区二区免费| 国产精品v欧美精品v日韩精品-国产欧美日韩精品区一区二污污污| 欧美精品国产系列一二三国产真人-在线观看国产午夜视频| 亚洲欧美日韩二区三区-国产在线欧美一区日韩二区| 欧美精品啪啪人妻一区二区-嫩草人妻舔舔羞羞一区二区三区| 人妻丝袜中文字幕在线视频-亚洲成av人片一区二区三区| 亚洲欧美日韩二区三区-国产在线欧美一区日韩二区| 精品国产综合一区二区三区-蜜臀一区二区三区刺激视频| 婷婷亚洲欧美综合丁香亚洲-超刺激国语对白在线视频| 少妇一区二区三区粉嫩av-国产精品区久久久久久久| 国产高清av免费在线观看-黄片毛片大全一区二区三区| 天天日天天干天天综合-99久久综合狠狠综合久久| 天天干天天天天天天天-亚洲综合av在线三区| 亚洲国产视频不卡一区-激情欧美视频一区二区| 久久网站中文字幕精品-三级精品久久中文字幕| 国产精品久久久精品一区-99久久免费精品国产男女性高好| 欧美日韩黑人在线播放-51在线精品免费视频观看| 国模自慰一区二区三区-日韩一级黄色片天天看| 99热在线精品免费6-av一区二区在线观看| 深夜三级福利在线播放-日韩精品一区二区在线天天狠天| 可以免费看污污视频的网站-日韩欧美不卡视频在线观看| 欧美视频在线观看国产专区-亚洲91精品在线观看| 亚洲综合久久综合激情-日韩欧美精品人妻二区少妇| 免费午夜福利在线观看-黄色日本黄色日本韩国黄色| 国产传媒中文字幕在线观看-午夜福利视频在线播放观看| 哦啊好大用力欧美视频-麻豆国产传媒片在线观看| 青青草原免费国产在线视频-精品人妻乱码一区二区三区四区| 精品老熟妇一区二区三区-日韩丰满一区二区三区|