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艾美捷生化試劑PsbA丨D1 protein of PSII

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更新時(shí)間:2021-08-31 16:42:23瀏覽次數(shù):176次

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生化試劑PsbA丨D1 protein of PSII PsbA丨D1 protein of PSII psbA基因已經(jīng)從許多植物、綠藻和藍(lán)藻中克隆出來。psbA基因位于葉綠體基因組中,編碼光系統(tǒng)II的核心成分D1蛋白。

由于PsbA(D1)蛋白質(zhì)的生物學(xué)特性,在樣品中可以觀察到許多降解產(chǎn)物,并且在使用抗PsbA抗體時(shí)可以觀察到這些降解產(chǎn)物,包括表觀分子量為24kDa16kDa的產(chǎn)物。D1降解是一組復(fù)雜的事件,觀察到的產(chǎn)物可能受到提取程序和收獲前細(xì)胞生理學(xué)的影響。D1和細(xì)胞色素b559之間可能發(fā)生交聯(lián),使蛋白質(zhì)在凝膠中的位置升高。在藍(lán)藻(PCC7942)中,通過將抗體與PsbA游離肽預(yù)孵育,三條不同的條帶競爭,表明所有條帶確實(shí)是PsbA及其前體或分解產(chǎn)物。還對菠菜和衣藻進(jìn)行了競爭分析,確認(rèn)了PsbA條帶的身份。

抗PsbA抗體不會(huì)檢測D2蛋白,因?yàn)橛糜诋a(chǎn)生PsbA抗體的肽與D2序列沒有同源性。艾美捷 PsbA|D1 protein of PSII應(yīng)用實(shí)例:

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不同數(shù)量的PsbA蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品(AS01 016S250 fmol1)、125 fmol2)、62.5 fmol3)、31.25 fmol4)、15.625 fmol5)和2µg總蛋白,從使用蛋白質(zhì)提取緩沖液PEBAS08 300)提取的Med46,7)中提取。樣品用1X樣品緩沖液(NuPAGE LDS樣品緩沖液(Invitrogen))稀釋,補(bǔ)充50 mM DTT,在70°C下加熱5分鐘,并在裝載前保持在冰上。蛋白質(zhì)樣品在4-12%Bolt Plus凝膠、LDS-PAGE上分離,并使用罐轉(zhuǎn)移法在PVDF上吸附70分鐘。在室溫下攪拌2%封閉劑或5%非脂肪乳(溶解于20 mM Tris137 mM氯化鈉pH 7.60.1%v/v)吐溫-20TBS-T)中)1小時(shí)后,立即封閉印跡。在室溫下攪拌,以1:10000的稀釋度(在封閉試劑中)在一級抗體中培養(yǎng)印跡1h。傾析抗體溶液,短暫沖洗印跡兩次,然后在室溫下攪拌,用TBS-T清洗1x15分鐘和3x5分鐘。將印跡在二級抗體(山羊抗兔IgG-辣根過氧化物酶結(jié)合物,推薦二級抗體AS09 602Agrisera)中培養(yǎng),在室溫下攪拌,在封閉試劑中稀釋至1:25 000,持續(xù)1h。按上述方法清洗污漬。根據(jù)制造商的說明,使用化學(xué)發(fā)光檢測試劑開發(fā)印跡。使用CCD成像儀(VersaDoc MP 4000)和Quantity One軟件(Bio-Rad)獲得斑點(diǎn)圖像。曝光時(shí)間為30秒。


Agrisera公司提供的植物領(lǐng)域的抗體涵蓋擬南芥、萊茵衣藻、藍(lán)藻、松柏類、硅藻、大豆、大麥、蒺藜苜蓿等等。艾美捷科技是Agrisera的中國代理商,為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的PsbA|D1 protein of PSII。



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