脂質(zhì)包被珠被設(shè)計用于蛋白質(zhì)下拉實驗。用于檢測純化蛋白質(zhì)、細胞裂解物中蛋白質(zhì)的脂質(zhì)結(jié)合，或放射性標記的體外翻譯產(chǎn)物的結(jié)合。

磷脂酰乙醇胺（PE）珠由瓊脂糖組成，每1毫升珠與10納摩爾的磷脂酰乙醇銨（PE）結(jié)合，足以進行幾次蛋白質(zhì)結(jié)合實驗。每1mL磷脂酰乙醇胺（PE）珠粒包括少量對照珠粒（P-B000）。更多數(shù)量的控制珠也可供購買。

作為Biogradetech-d家代理，艾美捷科技強烈推薦Biogradetech熱銷產(chǎn)品Phosphatidylethanolamine (PE) 瓊脂糖珠。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

脂質(zhì)珠檢測說明：

1. 脂質(zhì)包被珠有1毫升和0.1毫升兩種規(guī)格，以50%的懸液形式在1X PBS緩沖液中提供。

2. 每1毫升的訂單附帶200微升的對照珠。對照珠也可單獨購買，建議用于分析。

3. 儲存在2-8°C。產(chǎn)品對溫度和光線敏感，請勿冷凍。

4. 以1000 x g或更低的速度離心珠。不要高速離心珠，因為這可能會壓碎珠。

5. 每1毫升珠中總共有10毫摩爾的結(jié)合脂質(zhì)。

6. 珠的直徑范圍在45-165微米之間。

7. 每個蛋白質(zhì)使用50-100微升的50%懸液脂質(zhì)包被珠和對照珠。

8. 了解陽性對照蛋白列表。

脂質(zhì)珠 - 蛋白質(zhì)下拉協(xié)議

我們提供以下協(xié)議作為指南，并強烈鼓勵研究人員查閱科學文獻并進行優(yōu)化實驗，以確立對其感興趣的蛋白質(zhì)z有利的條件。

1. 充分混合珠（不要使用渦旋）。將50-100微升的50%珠懸液轉(zhuǎn)移到0.5-1.5毫升的管中。

2. 以1000 x g或更低的速度離心珠。小心移除上清液，避免丟失珠。

3. 用洗滌緩沖液的10倍過量洗滌珠。輕輕混合，孵育1-2分鐘。重復洗滌步驟兩次。

4. 小心移除洗滌上清液，并將珠在含有您的蛋白質(zhì)的結(jié)合緩沖液中重新懸浮。

a. 對于純化的蛋白質(zhì)，使用1-10微克的蛋白質(zhì)，用足夠的結(jié)合緩沖液稀釋形成50%脂質(zhì)珠懸液。

b. 對于細胞裂解物、提取物、亞細胞組分：使用大約1毫克的總蛋白質(zhì)對1毫升結(jié)合緩沖液。將整個1毫升準備好的樣品加入到您洗滌過的珠中。

5. 孵育蛋白質(zhì)-珠溶液1-3小時。孵育可以在室溫或4°C下進行，取決于您蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性。需要連續(xù)運動以保持珠懸浮。

6. 離心珠并小心移除上清液。如果需要，上清液可以用來監(jiān)測未結(jié)合的蛋白質(zhì)。

7. 用洗滌緩沖液的10倍過量洗滌珠。輕輕混合，孵育1-2分鐘。重復洗滌步驟五次。如果您選擇在結(jié)合緩沖液中使用牛血清白蛋白（BSA），請確保在進行下一步之前將其c底洗出。

8. 在最后一次洗滌后，通過向珠中加入等體積的2X Laemmli樣品緩沖液（或類似物）并加熱至70°C 10分鐘來洗脫結(jié)合的蛋白質(zhì)。

9. 加熱后，離心珠并移除上清液。將上清液儲存在4°C下，直到分析。丟棄珠。

10. 蛋白質(zhì)可以通過SDS-PAGE分離，并通過凝膠的Coomassie藍染色、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移和免疫印跡來檢測感興趣的蛋白質(zhì)，或進行自顯影。

文獻參考：

1) Hakuno, D., et al. (2018). “Hepatokine α1-Microglobulin Signaling Exacerbates Inflammation and Disturbs Fibrotic Repair in Mouse Myocardial Infarction." Scientific Reports 8(1): 16749.

2) Dudley, L. J., et al. (2019). “Intrinsic lipid binding activity of ATG16L1 supports efficient membrane anchoring and autophagy." The EMBO Journal: e100554.

Biogradetech成立于2015年，總部位于美國加利福尼亞州，早期以產(chǎn)品技術(shù)研發(fā)服務(wù)起家，逐步發(fā)展了廣泛的產(chǎn)品線，并將其商業(yè)化銷售，包括蛋白質(zhì)、抗體、酶、培養(yǎng)基、試劑盒和儀器。適用于細胞生物學、蛋白質(zhì)組學、分子生物學、免疫學、微生物學、診斷學、生物化學、神經(jīng)科學、血液分析和高通量藥物篩選等領(lǐng)域。

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