C-反應蛋白（馬）ELISA是一種高度敏感的雙位點酶聯馬血清中C-反應蛋白的ELISA定量測定以及血漿。僅供研究使用。不用于診斷程序。

作為ALPCO在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦ALPCO熱銷產品c反應蛋白(馬)ELISA, 96孔。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

c反應蛋白(馬)ELISA, 96孔檢測原理：

雙抗體夾心酶聯免疫吸附測定（ELISA）的原理如圖1所示。在這種測定中，樣品中的C反應蛋白（CRP）與已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗CRP蛋白抗體發(fā)生反應。通過洗滌去除未結合的蛋白質后，加入辣根過氧化物酶（HRP）偶聯的抗CRP蛋白抗體。這些酶標記的抗體與之前結合的CRP形成復合物。經過再次洗滌后，通過添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯苯胺（TMB）來測定與免疫吸附劑結合的酶。結合的酶量與測試樣品中CRP的濃度成正比；因此，450納米處的吸光度是測試樣品中CRP蛋白濃度的量度。測試樣品中CRP的量可以從標準曲線中插值得出，并根據樣品稀釋進行校正。

需要的材料但未提供

? 精密移液器（2 ?L至1000 ?L），用于制備和分發(fā)稀釋液

? 試管

? 噴霧瓶或微孔板洗滌/抽吸器

? 蒸餾水或去離子水

? 微孔板讀取器

? 制備試劑和緩沖溶液所需的各種玻璃器皿

? 計時器

? 離心機

? 抗凝劑（用于血漿樣品收集）

樣品收集和處理

所有血液成分和生物材料應視為潛在危險。

處理和處置時遵循通用預防措施。

如果血液樣品出現凝塊、嚴重溶血、脂血或樣品完整性受到質疑，請記錄并謹慎解釋結果。

以下列出的樣品收集和儲存條件僅供參考。

樣品穩(wěn)定性尚未評估。

? 血清樣品：應通過靜脈穿刺收集血液。血凝后通過離心分離血清。取出血清立即進行測定或分裝后儲存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復凍融。

? 血漿樣品：應將血液收集到含有抗凝劑的容器中，然后進行離心。立即進行測定或分裝后儲存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復凍融。

? 已知干擾物質：濃度高于0.1%的疊氮化物和硫柳汞會抑制酶反應。

樣品稀釋

測定要求每個測試樣品在使用前進行稀釋。每次進行測定時，所有樣品都應以雙份進行測定。推薦的稀釋比例僅供參考。

稀釋比例應基于未知樣品的預期濃度，以便稀釋后的樣品落在標準曲線的動態(tài)范圍內。如果不確定樣品值，強烈建議在運行整個板之前，先用一個或兩個代表性樣品進行系列稀釋。

? 血清和血漿樣品：推薦的起始稀釋比例是1:100。要制備1:100的樣品稀釋液，將5 ?L的樣品轉移到495 ?L的1X稀釋液中。這會產生1:100的稀釋比例。c底混合。

結果計算

1. 從所有孔的測試值中減去平均背景值（標準零的平均吸光度讀數）。

2. 對每個標準的平均重復讀數進行平均，并使用結果構建標準曲線。通過使用能夠生成四參數邏輯（4-PL）曲線擬合的計算機軟件來減少數據來構建標準曲線。也可以使用二次多項式（二次）或其他曲線擬合；然而，它們對數據的擬合精度會較低。

3. 從標準曲線中插值得到測試樣品值。校正稀釋因子，以得出原始樣品中的CRP蛋白濃度。

ALPCO產品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥、內分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

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