Hypoxyprobe?-1太平洋藍(lán)試劑盒組件的詳細(xì)描述

Hypoxyprobe?-1是一種取代的2-硝基咪唑，其化學(xué)名稱(chēng)為匹莫尼達(dá)唑鹽酸鹽，分子量為290.8；水溶性為400毫摩爾（116毫克/毫升）；在324納米處的紫外吸收（在0.9%生理鹽水中的消光系數(shù)為7020）。其游離堿基，匹莫尼達(dá)唑，分子量為254.3，pKa值為8.7，辛醇水分配系數(shù)為8.5。有關(guān)Hypoxyprobe?-1的作用機(jī)制、常見(jiàn)問(wèn)題解答（FAQ）和應(yīng)用，固體Hypoxyprobe?-1在室溫下避光存放兩年，并且在4攝氏度的0.9%生理鹽水（100克/升）中存放4.5年，未檢測(cè)到降解（UV和HPLC分析）。 匹莫尼達(dá)唑在缺氧細(xì)胞中被還原激活，并與蛋白質(zhì)、肽和氨基酸中的硫醇（巰基）基團(tuán)形成穩(wěn)定的加合物。太平洋藍(lán)染料-MAb1與這些加合物結(jié)合，允許通過(guò)免疫化學(xué)方法檢測(cè)它們。

太平洋藍(lán)染料-MAb1是一種染料偶聯(lián)的大鼠IgG1單克隆抗體（MAb克隆4.3.11.3），在含有1%牛血清白蛋白和0.09%疊氮鈉的PBS中，以0.5毫克/毫升的濃度供應(yīng)作為穩(wěn)定劑。感興趣的組織可以通過(guò)冷凍固定切片或甲醛固定的石蠟包埋切片的免疫組織化學(xué)研究，或者在組織解離后的流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行研究。 注意：太平洋藍(lán)染料-MAb1與匹莫尼達(dá)唑的蛋白質(zhì)、肽和氨基酸加合物結(jié)合，但在免疫組織化學(xué)處理過(guò)程中，肽和氨基酸加合物被沖洗掉，因此免疫組織化學(xué)缺氧檢測(cè)依賴(lài)于缺氧組織中匹莫尼達(dá)唑的蛋白質(zhì)加合物。

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【缺氧探針】太平洋藍(lán)試劑盒：

應(yīng)用：用于檢測(cè)細(xì)胞和組織缺氧的免疫化學(xué)方法，包括免疫熒光、免疫過(guò)氧化物酶或流式細(xì)胞術(shù)。這種Hypoxyprobe?-1太平洋藍(lán)試劑盒在甲醛固定的石蠟包埋的大鼠腫瘤組織中提供了強(qiáng)烈的免疫染色和非常低的背景。

數(shù)量：a. Hypoxyprobe?-1太平洋藍(lán)試劑盒包含100毫克、200毫克或1000毫克的Hypoxyprobe?-1（匹莫尼達(dá)唑鹽酸鹽）。通常，動(dòng)物研究中使用的劑量為每公斤體重60毫克。

b. 一個(gè)瓶（100毫克和200毫克試劑盒）或兩個(gè)瓶（1000毫克試劑盒），含有200微升的稀釋的太平洋藍(lán)染料偶聯(lián)的IgG1大鼠單克隆抗匹莫尼達(dá)唑抗體（克隆11.23.22.R）。每個(gè)瓶含有200微升的0.50毫克/毫升的太平洋藍(lán)染料-MAb1溶液，該溶液在含有1%牛血清白蛋白和0.09%疊氮鈉的PBS中。太平洋藍(lán)染料-MAb1的最佳稀釋度應(yīng)由研究者確定，但發(fā)現(xiàn)1:50-100稀釋度在大鼠腫瘤組織中能給出強(qiáng)烈的免疫熒光染色。特別為免疫熒光設(shè)計(jì)，太平洋藍(lán)染料-MAb1可以在熒光顯微鏡下或在流式細(xì)胞術(shù)和Western印跡應(yīng)用中被可視化。通常免疫熒光的抗體稀釋度比免疫過(guò)氧化物酶檢測(cè)系統(tǒng)中使用的要低。

不提供：用于免疫組織化學(xué)分析的標(biāo)準(zhǔn)試劑。

儲(chǔ)存：a. 將Hypoxyprobe?-1固體存放在室溫下避光處。（也可以存放在2-8攝氏度的暗處）。

b. 將太平洋藍(lán)染料-MAb存放在2-8攝氏度的暗處。不要冷凍。

檢測(cè)說(shuō)明

對(duì)正?；蚰[瘤組織缺氧的研究始于靜脈輸注、腹腔注射或口服Hypoxyprobe?-1（匹莫尼達(dá)唑鹽酸鹽）溶液，劑量為每公斤體重60毫克。對(duì)于一只25克的大鼠，這相當(dāng)于每只大鼠1.5毫克。在小鼠中使用高達(dá)400毫克/公斤的劑量，未觀察到毒性或組織缺氧的變化，但60毫克/公斤可以在低成本下獲得良好的免疫染色。 Hypoxyprobe?-1在生理鹽水中的溶解度為116毫克/毫升，因此可以使用非常小的體積來(lái)施用Hypoxyprobe?-1。注射或攝取后，Hypoxyprobe?-1分布到所有組織，包括大腦，但它只與那些氧濃度低于14微摩爾的細(xì)胞中的含硫蛋白質(zhì)形成加合物——相當(dāng)于在37攝氏度下的部分壓力pO2 = 10毫米汞柱。除了腫瘤，正常的組織如肝臟、腎臟和皮膚也包含在pO2 = 10毫米汞柱或以下的細(xì)胞。這些正常組織結(jié)合Hypoxyprobe?-1。小鼠中Hypoxyprobe?-1的血漿半衰期大約為25分鐘。相比之下，大鼠的血漿半衰期為45分鐘，狗為90分鐘，人類(lèi)為300分鐘。感興趣的大鼠組織可以在施用Hypoxyprobe?-1后60分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間收獲。在收獲時(shí)組織中的Hypoxyprobe?-1將在組織缺氧時(shí)被結(jié)合，但與組織在60分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間實(shí)驗(yàn)中暴露的量相比，殘留的Hypoxyprobe?-1的量非常小，因此由于殘留的Hypoxyprobe?-1引起的任何非特異性結(jié)合是不可檢測(cè)的。 除了動(dòng)物研究，Hypoxyprobe?試劑盒也可用于組織培養(yǎng)中的細(xì)胞。通常，細(xì)胞懸浮液在缺氧條件下與100到200微摩爾的Hypoxyprobe?-1一起孵化1到2小時(shí)。細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞旋轉(zhuǎn)收獲，固定并用太平洋藍(lán)MAb-1免疫染色。

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