Hypoxyprobe?-1綠色套件組件的詳細描述

1) Hypoxyprobe?-1是一種替代的2-硝基咪唑，其化學名稱為皮莫尼達唑鹽酸鹽，分子量為290.8；水溶性為400毫摩爾（116毫克/毫升）；在324納米處有紫外吸收（在0.9%的鹽水中消光系數為7020）。其游離堿基，皮莫尼達唑，分子量為254.3，pKa值為8.7，辛醇水分配系數為8.5。

固體Hypoxyprobe?-1在室溫下柔和光線中儲存兩年，在4攝氏度的0.9%鹽水（100克/升）中儲存4.5年，未檢測到降解（紫外和HPLC分析）。

皮莫尼達唑在缺氧細胞中被還原激活，并與蛋白質、肽和氨基酸中的硫醇（巰基）基團形成穩(wěn)定的加合物。FITC-MAb1與這些加合物結合，允許通過免疫化學方法進行檢測。

2) FITC-MAb1是一種熒光素結合的大鼠IgG1單克隆抗體（MAb克隆11.23.22.R），在含有0.09%普羅林作為穩(wěn)定劑的PBS中以0.5毫克/毫升的濃度供應。感興趣的組織可以通過免疫組織化學在冷凍固定切片或福爾馬林固定的石蠟包埋切片上進行研究，或者在組織解離后通過流式細胞術進行研究。

注意：FITC-MAb1與皮莫尼達唑的蛋白質、肽和氨基酸加合物結合，但在免疫組織化學處理過程中，肽和氨基酸加合物會被沖洗掉，因此免疫組織化學的缺氧檢測依賴于缺氧組織中皮莫尼達唑的蛋白質加合物。

作為Hypoxyprobe在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦Hypoxyprobe熱銷產品Hypoxyprobe綠色套件。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

Hypoxyprobe綠色套件：

應用：用于細胞和組織缺氧的免疫化學檢測，包括免疫熒光、免疫過氧化物酶或流式細胞術。該試劑盒在福爾馬林固定的石蠟包埋的大鼠腫瘤組織中提供強烈的免疫染色和非常低的背景。

數量：a. Hypoxyprobe?-1綠色試劑盒包含100毫克、200毫克或1000毫克的皮莫尼達唑鹽酸鹽。通常動物研究中使用的劑量為每公斤體重60毫克。

b. 一個瓶（100毫克和200毫克試劑盒）或兩個瓶（1000毫克試劑盒）含有200微升稀釋的FITC結合的IgG1大鼠單克隆抗體（克隆11.23.22.R）。每個瓶含有200微升的0.50毫克/毫升的FITC-MAb1溶液，溶于含有1%牛血清白蛋白和0.09%疊D化鈉的PBS中。FITC-MAb1的最佳稀釋度應由研究者確定，但發(fā)現1:50-100的稀釋度與1:50-100稀釋度的過氧化物酶結合的抗FITC二抗結合使用時，在大鼠腫瘤組織中能給出強烈的免疫染色。雖然FITC-MAb1不是專門設計用于免疫熒光，但可以用于此目的。通常免疫熒光的抗體稀釋度比免疫過氧化物酶檢測的要低。

不提供：用于免疫組化分析的標準試劑。

儲存：a. 將Hypoxyprobe?-1固體存放在室溫下避光處（也可以存放在2-8攝氏度）。

b. 將FITC-MAb存放在2-8攝氏度的黑暗中。不要冷凍。

檢測說明

1. 對正?；蚰[瘤組織缺氧的調查始于通過靜脈輸注、腹腔注射或口服給予Hypoxyprobe?-1（皮莫尼達唑鹽酸鹽）溶液，劑量為每公斤體重60毫克。對于一只25克的大鼠，這相當于每只大鼠1.5毫克。在小鼠中使用了高達400毫克/公斤的劑量，未檢測到毒性或組織缺氧的變化，但60毫克/公斤在低成本下能獲得良好的免疫染色。

Hypoxyprobe?-1在鹽水中的溶解度為116毫克/毫升，因此可以使用非常小的體積來施用Hypoxyprobe?-1。注射或攝取后，Hypoxyprobe?-1分布到所有組織，包括大腦，但它只與那些氧氣濃度低于14微摩爾的細胞中的含硫蛋白質形成加合物——相當于在37攝氏度下的部分壓力pO2 = 10毫米汞柱。

除了腫瘤，正常組織如肝臟、腎臟和皮膚也擁有pO2 = 10毫米汞柱的細胞或低于此值的細胞。這些正常組織會結合Hypoxyprobe?-1。

小鼠體內Hypoxyprobe?-1的血漿半衰期大約為25分鐘。相比之下，大鼠的血漿半衰期為45分鐘，狗為90分鐘，人類為300分鐘。感興趣的大鼠組織可在給予Hypoxyprobe?-1后15至90分鐘內采集。在采集時組織中的Hypoxyprobe?-1將在組織解離時被結合，但與組織在15至90分鐘實驗期間暴露的量相比，殘留的Hypoxyprobe?-1的量非常小，因此由于殘留的Hypoxyprobe?-1引起的任何非特異性結合是不可檢測的。

除了動物研究，Hypoxyprobe?套件也可用于組織培養(yǎng)中的細胞。通常，細胞懸浮液在缺氧條件下與100至200微摩爾的Hypoxyprobe?-1一起孵育1至2小時。通過細胞涂片、固定和用FITC-MAb1免疫染色來收集細胞。

圖：福爾馬林固定石蠟中缺氧探針結合的免疫過氧化物酶染色使用1:100稀釋的FITC-MAb1從嚙齒動物腫瘤中包埋組織切片1:100稀釋的辣根過氧化物酶偶聯兔抗FITC IgG。

Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探針公司）專注于研發(fā)非侵略性的缺氧標志物（Hypoxia maker）和缺氧依賴性的細胞因子，所有產品皆基于Pimonidazole核心結構來開發(fā)。 使用Pimonidazole HCl作為缺氧標記物，廣泛用在狗、大小鼠。缺氧探針試劑盒核心組分為：缺氧探針（Pimonidazole 或CCI-103F）和缺氧探針的抗體。不同試劑盒中的探針和抗體標記不同（可應用于免疫熒光（IF），免疫組化（IHC），WB或流式細胞分析（FC））

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