將高濃度和低濃度的純化猴IgM分別摻入3種血清中樣品。與預期值相比，觀察到的測定值范圍為83至105%，表明猴血清中IgM的準確定量。

作為Alpha Diagnostic International（ADI）在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦Alpha Diagnostic International（ADI）熱銷產品猴 IgM ELISA 試劑盒，96 次檢測，定量。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

未提供但必需的材料：

- 能夠提供100ul和1-10ml的移液器和移液管。建議使用多通道移液器。

- 用于稀釋樣品和抗猴IgM-HRP濃縮液的一次性玻璃或塑料1-15ml試管。

- 用于稀釋洗滌濃縮液和樣品稀釋液濃縮液的量筒；200ml至1L。

- 用于儲存稀釋洗滌液的儲液瓶；200ml至1L。

- 用于稀釋試劑濃縮液的蒸餾水或去離子水。

- 在450納米波長下的微孔板讀取器。

樣本收集和處理

通過靜脈采血，允許凝血，并在室溫下通過離心分離血清。不要加熱滅活血清。如果血清不立即檢測，可冷藏保存最多2周，或冷凍長期保存。避免凍融循環(huán)。

尚未研究使用血漿，但應該是適合檢測的樣本。

注意事項和安全指南

猴血清可能含有人畜共患的、跨物種的傳染性物質。處理含有血清的樣本時，包括標準品和對照品，始終要戴手套，并把這些樣本和容器作為生物危害廢物處理。

校準器、樣品稀釋液和抗體HRP含有溴硝基二噁烷（BND：0.05%，w/v）。終止液含有稀釋的硫酸。請遵循良好的實驗室操作規(guī)范，避免任何試劑與皮膚、眼睛或粘膜接觸。所有試劑都可以用大量水沖入下水道。TMB、硫酸和BND的MSDS可以請求或從ADI網站獲得：樣品稀釋液和抗蛋白G-HRP含有Proclin 300（0.05%，v/v）。

質量控制：

準確和可重復的檢測結果依賴于適當的存儲、處理和控制試劑和樣本溫度。按照指示存儲所有試劑，并只將用于檢測的試劑預熱至室溫。關鍵試劑和樣本的保質期會因長時間暴露在非冷藏條件下而縮短，導致檢測結果不準確。

所有溶液應清澈。渾濁或有顆粒物是試劑污染或不穩(wěn)定的跡象，可能會干擾檢測的正常進行。如有此情況，請勿使用。

樣本對照品 試劑盒中提供了一個陽性血清對照品，并賦予了IgM濃度值范圍。在此范圍內的恢復是檢測性能良好的指標。

每個實驗室還應檢測內部對照樣本，這些樣本代表實驗室預期的樣本人群，并且保持穩(wěn)定。也應該運行一個樣品稀釋液陰性對照。

標準曲線 標準品產生的信號應該從z低標準到最高標準連續(xù)增加OD，差異大于1.2 OD。

不連續(xù)增加或低信號可能表明技術、協議指導和/或試劑準備、使用或穩(wěn)定性存在問題。陰性稀釋對照的信號應低于z低標準。不要依賴于存在這些問題的檢測產生的結果。

技術 準確和可重復的檢測結果依賴于良好的實驗室技術，包括移液、板洗滌和處理樣本及試劑。

檢測程序：

將所有試劑預熱至實驗室溫度（18-30攝氏度）平衡（至少30分鐘）。

在工作樣品稀釋液中稀釋血清樣本。對于大多數正常的猴血清，大約4000倍的稀釋是適當的。為了準確性，建議進行兩個稀釋步驟，如下：

1) 10ul血清 + 990ul稀釋液 = [1:100]，

2) 25ul [1:100] + 975ul稀釋液 = [1:4000]。

不要稀釋標準品或陽性對照血清。

結果計算：

可以使用任何免疫分析軟件包計算結果。推薦使用四參數曲線擬合。如果軟件不可用，可以按照以下方法確定IgM濃度：

2. 計算重復樣本的平均OD值。

3. 在坐標紙上，將標準品的平均OD值（y軸）與IgM的濃度（ng/ml）（x軸）作圖。通過這些點繪制最佳擬合曲線以構建標準曲線。點對點構造最常見且可靠。

4. 可以通過標準曲線插值確定未知樣本和對照品中的IgM濃度。

5. 將樣本獲得的值乘以每個樣本的稀釋因子。

6. 產生信號高于1000 ng/ml標準品的樣本應進一步稀釋并重新檢測。

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Alpha Diagnostic International（ADI）公司于1993年成立， 是一家美國私營生物技術公司，總部位于德克薩斯州圣安東尼奧，具有USDA認證的動物試驗設施。公司致力于開發(fā)、制造和供應新型診斷和質量控制試劑及檢測試劑盒，用于人類和動物的基礎生物學和疾病研究。同時，還提供多肽合成定制服務和多抗產品以及其他抗體相關服務，例如純化親和素，酶耦聯物，染料，熒光染料等。ADI旨在準確了解科學研究人員和診斷測試界的需求，并迅速提供有效的解決方案，成為科學界值得信賴的創(chuàng)新試劑和解決方案提供商。

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