以兔為宿主制備的針對組蛋白H3在賴氨酸27位點三甲基化且絲氨酸28位點磷酸化（H3K27me3S28p）的多克隆抗體，使用KLH偶聯(lián)的合成肽作為免疫原。

作為BPS Bioscience在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BPS Bioscience銷售產(chǎn)品Anti-H3K27me3S28p多克隆抗體。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

Anti-H3K27me3S28p多克隆抗體：

克隆性：多克隆

宿主物種/表達系統(tǒng)：兔

純化方法：親和純化

形式：水溶液

配方：含有0.05%疊氮化物和0.05% ProClin 300的PBS緩沖液

濃度：50 ?g/295 ?l

免疫原：合成肽

儲存/穩(wěn)定性

在-80°C下可保存長達2年。分裝以避免反復凍融。分裝后可在-20°C下保存至少一個月。

染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）實驗結(jié)果

使用經(jīng)秋水仙堿處理的人HeLa細胞、針對H3K27me3S28p的抗體（產(chǎn)品編號25245）和優(yōu)化的qPCR引物組合進行ChIP實驗。實驗使用了100萬細胞的剪切染色質(zhì)?？贵w用量梯度為1、2、5和10 ?g/次ChIP實驗，并進行了分析。以2 ?g/IP的IgG作為陰性免疫沉淀對照。定量PCR使用了活性基因GAPDH的啟動子引物作為陰性對照，以及非活性基因MYT1和TSH2B的編碼區(qū)引物作為陽性對照。圖1顯示了回收率，以輸入量的百分比表示（免疫沉淀DNA與輸入DNA的相對量，經(jīng)qPCR分析后得出）。這些結(jié)果與H3K27me3S28p主要存在于非活性基因中的觀察結(jié)果一致。

ChIP-seq實驗結(jié)果

使用2 ?g針對H3K27me3S28p的抗體（產(chǎn)品編號25245），在150萬經(jīng)秋水仙堿處理的HeLaS3細胞的剪切染色質(zhì)上進行ChIP實驗。隨后，免疫沉淀的DNA在Illumina HiSeq測序儀上進行分析。文庫制備、簇生成和測序均按照制造商說明進行。51 bp的標簽通過BWA算法與人類基因組比對。圖2顯示了圍繞TSH2B和MYT1陽性對照基因（圖2A和B，箭頭所示）以及染色體3和20（圖2C和D）的基因組區(qū)域的富集情況。

抗體滴度測定

為了測定抗體滴度，使用針對H3K27me3S28p的抗體（產(chǎn)品編號25245）進行ELISA實驗，抗體進行梯度稀釋。使用的抗原是含有目標組蛋白修飾的肽段。通過繪制吸光度與抗體稀釋度的關(guān)系圖（圖2），估計抗體的滴度為1:4,300。

交叉反應性測試

使用針對H3K27me3S28p的抗體（產(chǎn)品編號25245）進行點雜交分析，測試其與其他修飾的組蛋白H3和H4肽段以及未修飾的H3K27S28序列的交叉反應性。將含有相應組蛋白修飾的肽段（100至0.2 pmol）點在膜上，抗體稀釋度為1:2,000。圖3顯示抗體對目標修飾具有高特異性。

Western Blot分析

A. 使用針對H3K27me3S28p的抗體（產(chǎn)品編號25245），對HeLa細胞的組蛋白提取物（15 ?g，泳道1）和1 ?g重組組蛋白H3（泳道2）進行Western Blot分析。抗體在含有5%脫脂奶粉的TBS-Tween中稀釋1:100。右側(cè)標記了目標蛋白的位置，左側(cè)顯示了分子量標記（單位：kDa）。

B. 使用針對H3K27me3S28p的抗體進行細胞周期實驗。對處于細胞周期不同階段的細胞進行Western Blot分析（1=非同步群體，2=G1/Sa，3=G1/Sb，4=S期，5=G2/M，6=M期，7=G1期）。圖片顯示在有絲分裂期間H3K27me3S28p表達的顯著峰值。

應用

ChIP/ChIP-seq（1 - 2 ?g/ChIP）

ELISA（1:200）

點雜交（1:2000）

Western Blot（1:1000）

運輸溫度：-20°C或-80°C

物種反應性：人

交叉反應性：特異性識別H3K27me3S28p。不與H3K9me3、H3K27me（1、2或3）、H3S10p、H3S28p或H3S28un發(fā)生交叉反應。在高濃度下與H3K9me3S10p有輕微交叉反應。

備注：每次免疫沉淀的抗體優(yōu)良用量應由終端用戶確定。建議測試1 - 5 ?g/次。

注意事項：避免反復凍融。

科學分類：抗體

監(jiān)管狀態(tài)：僅限研究使用

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認證的生命科學領(lǐng)域的供應商，公司一直致力于開發(fā)藥物研發(fā)領(lǐng)域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創(chuàng)立，從創(chuàng)立至今一直致力于提供藥物研發(fā)領(lǐng)域的創(chuàng)新解決方案，以推動新的藥物發(fā)現(xiàn)a。公司主要關(guān)注的領(lǐng)域包括免疫療法、表觀遺傳學、CRISPR、細胞信號轉(zhuǎn)導等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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