組蛋白H3上賴氨酸27的三甲基化（H3K27me3）與植物和動物發(fā)育及疾病過程中的轉(zhuǎn)錄抑制密切相關。這種修飾由多梳抑制復合體2（PRC2，由EZH2甲基轉(zhuǎn)移酶催化）維持，并可通過賴氨酸去甲基化酶（如JMJD3）去除。

以小鼠為宿主制備的針對組蛋白H3在賴氨酸27位點三甲基化（H3K27me3）的單克隆抗體，使用KLH偶聯(lián)的合成肽作為免疫原。

作為BPS Bioscience在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BPS Bioscience銷售產(chǎn)品Anti-H3K27me3單克隆抗體。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

Anti-H3K27me3單克隆抗體：

同種型：IgG1

克隆性：單克隆

宿主物種/表達系統(tǒng)：小鼠

純化方法：Protein A純化

形式：水溶液

配方：含有0.05%疊氮化物和0.05% ProClin 300的PBS緩沖液

濃度：50 ?g/50 ?l

免疫原：合成肽

儲存/穩(wěn)定性

在-80°C下可保存長達2年。分裝以避免反復凍融。分裝后可在-20°C下保存至少一個月。

染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）實驗結果

使用針對H3K27me3的單克隆抗體（產(chǎn)品編號25243）和優(yōu)化的qPCR引物組合，在人HeLa細胞中進行ChIP實驗。實驗使用了100萬細胞的剪切染色質(zhì)?？贵w用量梯度為1、2、5和10 ?g/次ChIP實驗，并進行了分析。以2 ?g/IP的IgG作為陰性免疫沉淀對照。定量PCR使用了活性基因c-fos和GAPDH的啟動子引物作為陰性對照，以及非活性基因MYT1和TSH2B的編碼區(qū)引物作為陽性對照。圖1顯示了回收率，以輸入量的百分比表示（免疫沉淀DNA與輸入DNA的相對量，經(jīng)qPCR分析后得出）。這些結果與H3K27me3主要存在于非活性基因中的觀察結果一致。

抗體的交叉反應性測試

為了測試特異性，使用針對H3K27me3的單克隆抗體（產(chǎn)品編號25243）進行ELISA實驗，抗體進行梯度稀釋。實驗孔分別包被了含有未修飾的H3K27區(qū)域以及單甲基化、二甲基化和三甲基化H3K27以及三甲基化H3K9的肽段。圖2顯示抗體對目標修飾的肽段具有高特異性。

Western Blot分析

使用針對H3K27me3的單克隆抗體（產(chǎn)品編號25243），對HeLa細胞的組蛋白提取物（15 ?g）進行Western Blot分析?？贵w在含有5%脫脂奶粉的TBS-Tween中稀釋1:1000。右側標記了目標蛋白的位置，左側顯示了分子量標記（單位：kDa）。

免疫熒光分析

HeLa細胞用針對H3K27me3的抗體（產(chǎn)品編號25243）和DAPI進行染色。細胞用4%甲醛固定10分鐘，并用含有5%正常山羊血清和1% BSA的PBS/TX-100進行封閉。細胞用H3K27me3抗體（左側）在封閉液中稀釋1:500進行免疫熒光標記，隨后用與Alexa594偶聯(lián)的抗小鼠抗體進行二抗標記。中間圖顯示了DAPI對細胞核的染色。右側圖顯示了兩種染色的合并圖像。

應用

ChIP（1 - 2 ?l/ChIP）

ELISA（1:3000）

Western Blot（1:1000）

免疫熒光（1:500）

運輸溫度：-20°C或-80°C

物種反應性：人

備注：每次免疫沉淀的抗體優(yōu)良用量應由終端用戶確定。建議測試1 - 5 ?g/次。

注意事項：避免反復凍融。

科學分類：抗體

監(jiān)管狀態(tài)：僅限研究使用

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認證的生命科學領域的供應商，公司一直致力于開發(fā)藥物研發(fā)領域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創(chuàng)立，從創(chuàng)立至今一直致力于提供藥物研發(fā)領域的創(chuàng)新解決方案，以推動新的藥物發(fā)現(xiàn)a。公司主要關注的領域包括免疫療法、表觀遺傳學、CRISPR、細胞信號轉(zhuǎn)導等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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