堿性磷酸酶（ALP）在堿性環(huán)境中催化磷酸酯的水解，生成有機自由基和無機磷酸鹽。 在哺乳動物中，這種酶主要存在于肝臟和骨骼中。血清中ALP水平顯著升高，一種被稱為高堿性磷酸酶血癥的疾病，與惡性膽道梗阻、原發(fā)性膽汁性肝硬化、原發(fā)性硬化性膽管炎、肝淋巴瘤和結節(jié)病有關。

簡單、直接且易于自動化的血清中ALP活性檢測程序在研究和藥物發(fā)現(xiàn)領域越來越受歡迎。 BioAssay Systems的QuantiChrom?堿性磷酸酶檢測試劑盒專為直接在生物樣本中測定ALP活性而設計，無需預處理。改進的方法利用對硝基苯磷酸酯作為底物，該底物可被ALP水解生成黃色產(chǎn)物（最大吸收波長為405 nm）。反應速率與酶活性成正比。

對硝基苯磷酸酯 → 對硝基苯酚 + 磷酸

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品堿性磷酸酶測定試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點

- 高靈敏度和寬線性范圍。 使用5 ?L血清或血漿樣本。檢測限為2 U/L，線性范圍高達800 U/L。

- 均質且簡單的操作程序。 簡單的“混合即測"程序可在5分鐘內可靠定量ALP活性。

- 穩(wěn)健且適用于高通量篩選（HTS）。 所有試劑均與高通量液體處理儀器兼容。

應用

- 直接檢測：血清、血漿及其他來源中的ALP活性。

- ALP生產(chǎn)過程中的特性分析和質量控制。

- 藥物發(fā)現(xiàn)：高通量篩選ALP抑制劑以及評估ALP抑制劑的效果。

試劑盒組成（96孔板，250次檢測）

- 檢測緩沖液：50 mL，pH 10.5

- 醋酸鎂：1.5 mL，0.2 M

- pNPP液體：600 ?L，1 M

- 校準液：10 mL

- 酒石酸

儲存條件

- 試劑盒在室溫下運輸。將pNPP液體存于-20°C，其他組分存于4°C。

- 保質期：收到后12個月。

注意事項

- 試劑僅供研究使用。使用試劑時應遵循實驗室試劑的常規(guī)預防措施。請參閱材料安全數(shù)據(jù)表以獲取詳細信息。

操作程序

- 本檢測基于動力學反應。建議使用多通道移液器。向樣本中加入工作試劑應迅速，混合應簡短但充分。檢測可在室溫或37°C下進行。

- 試劑準備：將試劑平衡至室溫。工作溶液的配制：對于每次96孔檢測，將200 ?L檢測緩沖液、5 ?L醋酸鎂（最終濃度5 mM）和2 ?L pNPP液體底物（10 mM）混合。建議每次檢測前新鮮配制，盡管工作溶液在室溫下至少穩(wěn)定一天。

- 樣本準備：ALP在4°C下可穩(wěn)定保存48小時，在-20°C下可穩(wěn)定保存2個月。EDTA、草酸鹽、氟化物和檸檬酸鹽是已知的ALP抑制劑，應在樣本準備過程中避免使用。血清、血漿（不含EDTA/檸檬酸鹽，最好是未溶血的）和細胞培養(yǎng)基可以直接檢測。要檢測細胞內的ALP，可以按照以下方法制備細胞裂解液：用PBS洗滌10?個細胞，并在室溫下用0.5 mL蒸餾水中的0.2% Triton X-100震蕩20分鐘進行裂解。

實例

使用96孔板方案。人的ALP活性（U/L）為13.4±0.4大鼠血清為190.4±1.6，山羊血清為202.8±4.3。

96孔平板測定ALP反應動力學隨著ALP濃度的增加

文獻參考：

1. Sul, et al. (2020). Atherogenic diet-induced bone loss is primarily due to increased osteoclastogenesis in mice. The Journal of Nutritional Biochemistry. 79: 108337.

2. Harb, S. V., et al. (2020). Hydroxyapatite and β-TCP modified PMMATiO2 and PMMA-ZrO2 coatings for bioactive corrosion protection of Ti6Al4V implants. Materials Science and Engineering: C. 116: 111149.

3. Harper, E., et al. (2020). RANKL treatment of vascular endothelial cells leading to paracrine pro-calcific signaling involves ROS production.Molecular and Cellular Biochemistry. 464(1-2): 111-117. 

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術生物技術公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質的生化檢測試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學研究的檢測試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

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