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技術(shù)文章

外周血細(xì)胞瑞氏(Wright)染色及計數(shù)實驗

閱讀:708          發(fā)布時間:2018-12-18

實驗方法原理    
瑞氏染料中有美藍(lán)和伊紅兩種成分,前者為堿性,后者為酸性,它們與細(xì)胞內(nèi)的各種物質(zhì)具有不同的親和力,使其顯現(xiàn)出不同的色調(diào)。血細(xì)胞核由去氧核糖核酸和強(qiáng)堿性的組蛋白、精蛋白等形成核蛋白。這種強(qiáng)堿性的物質(zhì)與瑞氏染料中的酸性染料伊紅有親和力,所以染成紅色;核蛋白中還有少量的 弱酸性蛋白,它們又與染液中的堿性染料美藍(lán)起作用而染成藍(lán)色,但含量太少,藍(lán)色反應(yīng)極弱 ,故核染色呈現(xiàn)紫紅色。較幼稚的細(xì)胞之胞漿和細(xì)胞核之核仁中含有酸性物質(zhì),它們與染料中的堿性染料美藍(lán)有親和力,故染成藍(lán)色。
實驗材料    血液
試劑、試劑盒    瑞氏染料純甲醇磷酸二氫鉀磷酸氫二鈉
儀器、耗材    顯微鏡玻片蓋玻片滴管
實驗步驟    
1.  制作血涂片

(1)滴一小滴血(約5 ul)于干凈玻片上,推片與玻片應(yīng)呈約30°角,用力均勻而較快,且不可復(fù)推。

(2)如血滴較小,推得較慢,角度小于30°,所制涂片較薄。

(3)如血滴較大,推得較快,角度比30°大時,則所制涂片較厚。

2.  將標(biāo)本放平(置于一個固定架上),用滴管將染液滴于涂片上,可用滴管將染液驅(qū)散,使其布滿整個涂片。

3.  染液布滿整個涂片后,稍等片刻或立即加入緩沖液,并使緩沖液與染液混均勻。

4.  染液與緩沖液的比例

(1)染液量要充足,否則染液很快蒸發(fā),將染料沉淀于細(xì)胞上。

(2)染液與緩沖液的比例為1:2~4左右比較合適。

(3)稀釋度越大,染色時間越長,細(xì)胞著色較好,反之則越差。

5.  染色時間:視具體情況而定,一般約需10~30分鐘。

6.  沖洗:用自來水沖洗涂片上之染料。

7.  顯微鏡檢查:待自然干燥后用光學(xué)顯微鏡檢查。
收起 
注意事項    
1. 制作血涂片應(yīng)避免氣泡,厚度適中。

2. 染液與緩沖液的比例要適中。
其他    
一、正常血細(xì)胞形態(tài)

1.  成熟紅細(xì)胞:正常紅細(xì)胞為兩面微 凹而呈盤狀,染色后則呈中心淺染之桔紅色細(xì)胞,平均直徑7.6 um。

2.  成熟中性粒細(xì)胞:PB中有兩種,桿狀核和分葉核。桿狀核粒細(xì)胞形態(tài):圓形或橢圓形,直徑10~13 um。胞核如桿狀、帶狀,胞核之凹超過假設(shè)核圓徑的3/4,而且兩端的內(nèi)外有相當(dāng)一段的平行。染色質(zhì)凝固成塊狀,著色不均勻,其間可有空白區(qū)。胞漿內(nèi)已不含有嗜堿性物質(zhì),而滿布中性顆粒。中性分葉核粒細(xì)胞:圓形,直徑10~13 um。核呈分葉狀,少者分兩葉,多者六、七葉以上,葉與葉之間有細(xì)絲相連或*斷開, 或互相重疊。染色質(zhì)成細(xì)塊狀。胞漿內(nèi)布滿中性顆粒。

3.  成熟淋巴細(xì)胞:圓形,直徑5~18 um。核圓形或擬蠶豆?fàn)睿旧|(zhì)致密成團(tuán)塊狀。胞漿量少,藍(lán)色,可有少許圓形、周邊整齊的嗜天青顆粒。大淋巴細(xì)胞胞漿量多,呈淡藍(lán)色

4.  單核細(xì)胞:圓形或不規(guī)則形,直徑12~20 um。胞核居中或偏一側(cè),其形不規(guī)則。染色質(zhì)凝集如篩底狀或粗線條網(wǎng)狀,但無凝集的塊狀染色質(zhì)。胞漿量多,灰藍(lán)色,散布許多細(xì)小的粉紅色顆粒,顆粒多者甚至使胞漿成為粉紅色,可有空泡和外漿出現(xiàn)。

5.  血小板:正常血小板為星形、逗點(diǎn)狀或不規(guī)則狀,直徑2~5 um,呈淡藍(lán)色,中央推聚 干淡紫紅色的小顆粒。

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