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測(cè)定原代細(xì)胞因子生物活性的四種方法
閱讀：1057 發(fā)布時(shí)間：2018-5-24朋友們知道，不同的原代細(xì)胞因子是有著*的生物學(xué)活性，我們今天來看的也就是相關(guān)它，主要是來看如何測(cè)定，這里整理了幾種細(xì)致的方法，下面我們就一起來看上海恒遠(yuǎn)詳說實(shí)驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞因子生物活性的四種方法。
1、促進(jìn)細(xì)胞增殖和增殖抑制法
檢測(cè)細(xì)胞因子促生長活性或抑制生長活性是將不同稀釋度的待測(cè)樣品或細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品與培養(yǎng)的細(xì)胞株共同培養(yǎng)一定時(shí)間，然后檢測(cè)增殖的細(xì)胞數(shù)。前者的增殖細(xì)胞數(shù)與細(xì)胞因子的含量成正比，而后者的增殖細(xì)胞數(shù)與細(xì)胞因子的含量成反比。常用的檢測(cè)細(xì)胞增殖的方法有3H-TdR摻入法、比色法、染色法和直接計(jì)數(shù)法等。其中測(cè)定細(xì)胞代謝酶反應(yīng)細(xì)胞增殖數(shù)的比色法包括 MTT、XTT、MTS和NAG等方法，可在酶標(biāo)檢測(cè)儀上自動(dòng)化檢測(cè)，且不接觸同位素，較為常用。此外，測(cè)定代謝產(chǎn)物熒光強(qiáng)度的方法也可檢測(cè)增殖細(xì)胞數(shù)，如ATP法和cAMP法。細(xì)胞因子還能誘導(dǎo)靶細(xì)胞表達(dá)某些表面分子或分泌一些蛋白質(zhì)，可以用熒光素標(biāo)記抗體檢測(cè)表達(dá)相應(yīng)分子的細(xì)胞數(shù)，或用特定方法測(cè)定細(xì)胞分泌的蛋白質(zhì)，間接了解細(xì)胞因子的活性。
各種集落刺激因子、作用于造血系統(tǒng)的不同細(xì)胞，可促進(jìn)其增殖及在半固體瓊脂凝膠系統(tǒng)中克隆培養(yǎng)骨髓細(xì)胞的集落形成，故可采用集落形成試驗(yàn)研究CSF的水平。
2、細(xì)胞毒活性測(cè)定法
許多細(xì)胞因子針對(duì)轉(zhuǎn)化的細(xì)胞及病毒感染的細(xì)胞具有溶細(xì)胞或抑制細(xì)胞生長的活性。檢測(cè)細(xì)胞因子溶細(xì)胞/細(xì)胞毒活性或抑制生長活性是將不同稀釋度的待測(cè)樣品或細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品與培養(yǎng)的細(xì)胞株共同培養(yǎng)一定時(shí)間，然后檢測(cè)存活的靶細(xì)胞數(shù)，并與對(duì)照比較求得溶細(xì)胞或抑制細(xì)胞生長的百分率，或以O(shè)D值對(duì)樣品稀釋度作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)品的劑量反應(yīng)曲線，從曲線上求得引起相應(yīng)反應(yīng)的待測(cè)樣品的含量。檢測(cè)活靶細(xì)胞數(shù)的方法同促細(xì)胞增殖法。
生物活性檢測(cè)法敏感性往往高于細(xì)胞因子的免疫學(xué)檢測(cè)法，且不需要各種標(biāo)記的特異性抗體，可直接反映待測(cè)細(xì)胞因子的活性水平。用生物學(xué)活性檢測(cè)法得到的細(xì)胞因子含量一般以活性單位來表示。但本法易受多種因素的干擾，且不能區(qū)分樣本中某些具有相似或相反生物學(xué)效應(yīng)的細(xì)胞因子；長期培養(yǎng)的靶細(xì)胞敏感性可發(fā)生變異或所使用的不同靶原代細(xì)胞對(duì)同一種細(xì)胞因子的較敏感性存在差異等。使檢測(cè)結(jié)果難以統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)，因大多數(shù)細(xì)胞因子在體液中含量甚少，難以直接測(cè)定，一般均需要先進(jìn)行體處誘導(dǎo)細(xì)胞因子產(chǎn)生，才能進(jìn)行上述細(xì)胞因子活性檢測(cè)。
熱休克蛋白90αIgG 人補(bǔ)體7(C7)
熱休克蛋白HSP105IgG 人補(bǔ)體3裂解產(chǎn)物(C3SP)
熱休克因子1IgG 人補(bǔ)體1抑制物(C1INH)
熱休克轉(zhuǎn)錄因子2IgG 人補(bǔ)體1q(C1q)
人、大、小鼠、羊、牛beta內(nèi)啡肽IgG 人玻連蛋白/體外粘連蛋白(VN/CD51+CD61)
人、大、小鼠膜粘連蛋白 IIgG 人波形蛋白(VIM)
人鼻咽癌癌基因IgG 人丙型肝炎IgM(HCV-IgM)
人促黃體生成素受體IgG 人丙型肝炎IgG(HCV-IgG)
人宮頸癌基因/bri3結(jié)合蛋白IgG 人丙酮酸脫氫酶E1(PDH E1)
人巨細(xì)胞病毒PP65/CMV低基質(zhì)磷脂蛋白IgG 人丙酮酸激酶M2型同工酶(M2-PK)
原代細(xì)胞