化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
選對(duì)了ELISA試劑盒用對(duì)了試驗(yàn)技巧，就會(huì)讓您的試驗(yàn)功率事半功倍
閱讀：1108 發(fā)布時(shí)間：2019-1-25
說到ELISA Kit，信任大家都不會(huì)陌生。ELISA Kit的誕生，是為了幫助科研作業(yè)者省掉繁瑣的試驗(yàn)過程，進(jìn)步科研功率。假如選對(duì)了試劑盒，用對(duì)了試驗(yàn)技巧，就會(huì)讓您的試驗(yàn)功率事半功倍。
一.如何選購ELISA Kit
市面上任意品牌的一個(gè)ELISA Kit售價(jià)都在1000元以上假如選錯(cuò)了試劑盒輕則丟失一筆科研經(jīng)費(fèi)重則毀掉整個(gè)試驗(yàn)課題所以選個(gè)對(duì)的，很有必要！市面上的ELISA Kit質(zhì)量良莠不齊，想要挑選到適宜的試劑盒還真不是一件很容易的事情。真真假假，難以區(qū)分。
1 查找待測樣本的蛋白濃度：能夠通過NCBI的文獻(xiàn)，uniprot，pax-dab上給出的蛋白表達(dá)量參閱值來比較ELISA試劑盒中給出的樣本值與報(bào)道值是否一致；
2 試劑盒的應(yīng)用種屬、檢測樣本的品種：除試劑盒特別闡明外，一般不同種屬不能通用。常見待測樣本品種有：血清和血漿（不同抗凝劑），細(xì)胞上清，和細(xì)胞裂解液，試劑盒中不同樣本的稀釋液不混用；
3 試劑盒的檢測規(guī)模：也就是標(biāo)曲規(guī)別要注意待測樣本濃度是否落在標(biāo)曲規(guī)模內(nèi)，關(guān)于濃度很高的樣本，能夠先進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)摸索到比較好的稀釋倍數(shù)后再很多測定樣本。
4 試劑盒中的稀釋線性及回收率：
a.稀釋線性一般指樣本稀釋線性，是將樣本梯度稀釋下來，看各稀釋梯度濃度是否成線性；參閱樣本稀釋線性能夠挑選樣本的稀釋倍數(shù)；
b.稀釋線性也有做加標(biāo)稀釋線性的情況，加標(biāo)稀釋線性是將規(guī)范品參加樣本中測定參加的規(guī)范品濃度測定是否準(zhǔn)確；同樣也是斷定待測樣本稀釋倍數(shù)的參閱指標(biāo)。一般線性和回收率的規(guī)模在80%-120%比較適宜；
5 試劑盒的其它指標(biāo)：
a.靈敏度：試劑盒能夠檢測到的樣本低濃度的才干，假如待檢指標(biāo)含量很低，需求挑選高靈敏度的ELISA試劑盒；
b.板間和板內(nèi)的變異系數(shù)（CV%）:反映板內(nèi)和不同板之間是否均勻，CV%一般小于10% 比較好。
6 試劑盒的有效期：試劑盒的有效期一般是半年至一年，樣本準(zhǔn)備時(shí)刻需求考慮到試劑盒的有效期。
二.ELISA Kit 運(yùn)用技巧
選對(duì)ELISA Kit只是步要想獲得理想的試驗(yàn)成果還需掌握運(yùn)用技巧所以用對(duì)了，才干事半功倍！Bio-Swamp試劑盒團(tuán)隊(duì)，歷經(jīng)多年的實(shí)踐，總結(jié)了ELISA Kit運(yùn)用技巧，與您分享。
1 樣本的準(zhǔn)備：盡量運(yùn)用新鮮樣本，不運(yùn)用有溶血，被細(xì)菌污染、標(biāo)本保存時(shí)刻過長和標(biāo)本凝結(jié)不全的樣本。ELISA檢測宜采集新鮮標(biāo)本，如不能立即測定，5天之內(nèi)應(yīng)4℃保存，關(guān)于1周后檢測的樣本應(yīng)低溫凍存；做好分裝，長時(shí)刻凍存的樣本防止反復(fù)凍融。
2 仔細(xì)閱讀闡明書，了解整個(gè)流程，推薦畫出扼要步驟圖；提早準(zhǔn)備試劑，比如常見20X洗滌液是濃縮液，需求用超純水提早稀釋準(zhǔn)備好。一般的檢測抗體和酶標(biāo)二抗需求用對(duì)應(yīng)的稀釋液稀釋至作業(yè)濃度。
3 不同批次的試劑不要混用，查看各組分的有效期。
4 預(yù)包被的酶標(biāo)板條和各試劑組份需求室溫平衡30 min以上，這樣做的意圖能使反響微孔內(nèi)的溫度較快地到達(dá)所需溫度，預(yù)防后續(xù)試驗(yàn)中由于孵育溫度或是時(shí)刻不行充沛，而將一些弱陽性樣本不能檢出。
5 待測樣本加樣：待檢樣本過多時(shí)，建議分批操作；需求稀釋的樣本提早做好稀釋，注意選對(duì)適宜稀釋液；控制好加樣時(shí)刻，防止加樣費(fèi)時(shí)過長造成誤差；注意加樣視點(diǎn)，垂直參加孔底，不要接觸孔壁, 做到一份樣本一個(gè)移液頭，防止交叉污染。
6 溫育和洗板：溫育時(shí)刻和溫度一般根據(jù)試劑盒的闡明書進(jìn)行挑選。溫育時(shí)能夠選用水浴或許濕盒孵育,防止“邊緣效應(yīng)”。①手工洗板時(shí)，拍板時(shí)要垂直，防止交叉污染，用力不能過猛，防止抗原抗體復(fù)合物脫離；②洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)經(jīng)常查看沖洗頭是否通暢。
7 顯色：市售ELISA 試劑盒中，一般是以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的顯色液，反響條件為37℃或室溫反響15～30 min。顯色反響需求避光。
8 讀數(shù)和數(shù)據(jù)剖析：停止后讀取成果盡量在15min內(nèi)完成，讀取OD值時(shí)酶標(biāo)儀需先預(yù)熱15～30 min再進(jìn)行。數(shù)據(jù)剖析一般用四參數(shù)和直線擬合法，挑選哪種擬合方式，能夠根據(jù)標(biāo)曲的相關(guān)系數(shù)（R2）來斷定，R2一般需求大于0.99。