化工儀器網(wǎng)
技術文章
黑色素瘤相關抗原E2/肝細胞癌相關蛋白3?抗體分子標記技術
閱讀：127 發(fā)布時間：2023-5-18黑色素瘤相關抗原E2/肝細胞癌相關蛋白3抗體分子標記技術：
（一）原理
當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應。蛋白質(zhì)分子可進行鹵化反應的基團主要為殘基,殘基也可能進行化。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應。
（二）準備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體；0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5；無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鮮制備的含2mg/m1絡胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5）；胺T反應終止緩沖液；
（三）操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行；
2.如果氧化反應損傷蛋白質(zhì)，可將抗體與異硫酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m，并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml；
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年；
4.1251標記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天）；
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低；
6.碘化偶爾會對抗原的抗體結合位點有干擾,因此降低其結合能力,但這種情況很少見。
Phospho-Ack1 (Tyr859 + 860)磷酸化Ack1抗體
phospho-AMPK alpha-1(Ser485+Ser491)磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體
phospho-AMPK beta 1 (Ser108)磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體
phospho-ALK (Tyr1604)磷酸化間變型淋巴瘤激酶抗體
phospho-ATM(Ser1981)磷酸化毛細血管擴張性共濟失調(diào)癥突變蛋白抗體
phospho-ATP citrate lyase (Ser455)磷酸化三磷酸腺檸檬酸裂解酶抗體
phospho-ATR (Ser428)磷酸化ATR抗體
AMN1細胞核重定位及紡錘體檢查點蛋白AMN1抗體
ASF1A細胞衰老相關蛋白ASF1A抗體
AGPHD1氨基糖苷類磷酸結構域蛋白抗體
ASGPR1唾液酸糖蛋白受體1抗體
ARSF芳香基硫酸酯酶F抗體
AKAP5A激酶錨定蛋白5抗體
ATXN3L小腦脊髓共濟失調(diào)蛋白3抗體
ASTE1ASTE1蛋白抗體
phospho-APG4B(Ser309)磷酸化自噬相關蛋白4B抗體
AFAP微絲相關蛋白1抗體
ADORA1腺苷A1A受體抗體
ARSB芳基硫酸酯酶B抗體
ABATγ氨基丁酸轉(zhuǎn)氨酶抗體
A2BP1共濟失調(diào)蛋白2結合蛋白1抗體
ADAM17腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)換酶
ARNT2 芳香烴受體核轉(zhuǎn)錄蛋白2抗體
ABH8AlkB同源蛋白8抗體