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詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞；THP-1培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
品牌 懸浮生長
特征特性 該細(xì)胞從一名1歲的患有急性單核細(xì)胞性白血病的男孩的外周血中分離建立。該細(xì)胞可以吞噬乳膠顆粒和激活的紅細(xì)胞，細(xì)胞膜和胞漿內(nèi)均沒有免疫球蛋白，表達(dá)C3R和FcR；可受佛波酯TPA誘導(dǎo)向單核系方向分化；可作為轉(zhuǎn)染宿主。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1：
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C54
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR STR鑒定
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞；THP-1培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗)，晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-VEGFR-3/FLt-4 /FITC 熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體-3IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
C-erbB-4/HER4/erbB-4 (epidermal growth factor receptor4) c-erbB-4癌基因抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
CD68抗體(人、) Anti-CD68 0.1ml
SLC25A6 英文名稱： 線粒體載體腺嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)運蛋白6抗體 0.2ml
ETFDH 英文名稱： 電子轉(zhuǎn)移黃素蛋白脫氫酶抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-GATA-4(ser 262) 磷酸化GATA結(jié)合蛋白4抗體 規(guī)格 0.1ml
C-erbB-4/HER4/erbB-4 (epidermal growth factor receptor4) c-erbB-4癌基因抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
SP-A ELISA Kit 大鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白AMulti-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-Urocortin 3 尿皮質(zhì)素UCN3抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh GCP-2 粒細(xì)胞趨化蛋白2抗體 規(guī)格 0.1ml
EM-2(Human endomorphin-2) ELISA Kit 人內(nèi)肽-2 96T
Nanos3 英文名稱： 骨巢蛋白抗體 0.2ml
Alpha 2 antiplasmin 英文名稱： α2纖溶酶色素上皮衍生因子抗體 0.2ml
Anti-Urocortin 3 尿皮質(zhì)素UCN3抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
TSP-1 ELISA Kit 大鼠血小板反應(yīng)蛋白/凝血酶敏感蛋白1 96T
Nkx2.5 英文名稱： 心臟特異性同源盒轉(zhuǎn)錄因子NKX2.5抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh GLCNE GLCNE蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
PA-IgG/M/A ELISA Kit 大鼠抗血小板抗體IgG/M/AMulti-class antibodies規(guī)格： 48T
ATP7A 英文名稱： 銅轉(zhuǎn)運蛋白質(zhì)α鏈抗體 0.1ml
Anti-TRADD 死亡區(qū)的壞死因子受體1相關(guān)蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Anti-DEC-205/CD205/Ly75/FITC 熒光素標(biāo)記CD205抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-MAP-2/FITC 熒光素標(biāo)記微管相關(guān)蛋白2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Calmodulin/CaM I 鈣調(diào)節(jié)素抗體(鈣調(diào)蛋白/鈣調(diào)素) 規(guī)格 0.1ml
Anti-CSP (circumsporozoite protein/Plasmodium yoelii) 環(huán)子孢子蛋白(約氏瘧原蟲)抗原 0.5mg
HSD3B7 英文名稱： 滋養(yǎng)層細(xì)胞抗原3β7抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh SERPINB10 絲氨酸蛋白酶抑制劑B10抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-MAP-2/FITC 熒光素標(biāo)記微管相關(guān)蛋白2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
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