化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞；PUMC-mips-A5培養(yǎng)
形態(tài)特性 克隆樣
品牌 貼壁生長
特征特性 裸鼠移植實(shí)驗(yàn)證明可向三個(gè)胚層分化。
培養(yǎng)條件 KO-DMEM + 15% FBS + 103U/ml LIF + 2mM L-Glu + 1% NEAA + 0.1M β-Mer
傳代方法 1：
10傳代；3~4天傳代一次
傳代情況
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法（-）
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞；PUMC-mips-A5培養(yǎng)操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長曲線
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗(yàn))，晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
Anti-Phospho-PDGF Receptor alpha(Tyr849)/PDGF Receptor beta (Tyr857)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化血小板源性生長因子受體α/β抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rabbit Anti-chi IgM/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗雞IgMMulti-class antibodies規(guī)格： 0.3ml
轉(zhuǎn)錄因子E2F-1抗體 Anti-E2F1 0.1ml
Goat Anti-human IgG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗人IgG 0.1ml
FBXL16 英文名稱： FBXL16蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-TNIK(Ser764) 磷酸化TRAF2和NCK激酶相互作用蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-chi IgM/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗雞IgMMulti-class antibodies規(guī)格： 0.3ml
RBP-4 ELISA Kit 大鼠視黃醇結(jié)合蛋白4Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-TNFSF14 壞死因子配體超家族成員14抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh GLT8D2 糖基轉(zhuǎn)移酶GLT8D2抗體 規(guī)格 0.2ml
CK-13(Human cytokeratin 13) ELISA Kit 人細(xì)胞角蛋白13 96T
NS5ATP9 英文名稱： 丙型肝炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白5A反式激活蛋白9抗體 0.2ml
AAK1 英文名稱： AP2關(guān)聯(lián)激酶1抗體 0.2ml
Anti-TNFSF14 壞死因子配體超家族成員14抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
THAA(Human thyroid hormone autoantibodies) ELISA Kit 人甲狀腺非肽激素抗體 96T
PLTP 英文名稱： 磷脂轉(zhuǎn)移蛋白抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh HIST1H2AH 組蛋白H2A/S抗體 規(guī)格 0.2ml
ATM(Human Ataxia angiectasia mutated) ELISA Kit 人毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)突變基因Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
CHRDL2 英文名稱： 新因子1抗體 0.1ml
Anti-PIBF 孕激素誘導(dǎo)阻斷因子抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
sCD30(Mouse soluble cluster of differentiation 30) Elisa Kit 小鼠可溶性CD30Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-phospho-c-Abl/v-abl(Thr735) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Ensconsin 上皮細(xì)胞微管相關(guān)蛋白7抗體 規(guī)格 0.2ml
BALP ELISA Kit 大鼠骨堿性磷酸酶 96T
MCM5 英文名稱： 染色體維持缺陷蛋白5抗體 0.1ml
ADORA2B 英文名稱： 腺苷A2b受體/神經(jīng)生長因子1受體抗體 0.1ml
Anti-phospho-c-Abl/v-abl(Thr735) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
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