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詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 小鼠肉瘤細(xì)胞；CCRFS-180培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
品牌 貼壁生長
特征特性 S-180細(xì)胞建于1959年（Foleg，G，et al）。該細(xì)胞系保持了肉瘤的腫瘤原性，可用于腫瘤發(fā)生機(jī)理的體內(nèi)外研究。在體外，廣泛用于腫瘤花療法的篩選試驗(yàn)（Cancer chemotherapy screening test）。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS：
Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1：
3傳代,2-3天傳一代
傳
小鼠肉瘤細(xì)胞；CCRFS-180培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗(yàn))，晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-Phospho-NPM (Thr95)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化核仁磷酸蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-HBeAg/FITC 熒光素標(biāo)記小鼠抗人乙肝e抗原抗體(1)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
CC趨化因子受體3抗體 Anti-CCR-3 0.2ml
Goat Anti-rat IgG/Cy7 Cy7標(biāo)記的羊抗大鼠IgG 0.1ml
FNDC8 英文名稱： Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白8抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh PNK1/PNKP 多聚合苷酸激酶3磷酸化酶抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-HBeAg/FITC 熒光素標(biāo)記小鼠抗人乙肝e抗原抗體(1)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
PL-A2 ELISA Kit 大鼠磷脂酶A2Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-Phospho-HSP27 (Ser78)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化熱休克蛋白27抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh FRA2/FOSL2 FRA2/FOSL2抗體 規(guī)格 0.1ml
BMP-6(Mouse Bone morphogenetic protein 6) ELISA Kit 小鼠骨形成蛋白6 96T
Neuronal thread protein AD7c-NTP 英文名稱： 神經(jīng)絲蛋白抗體 0.2ml
ASB9 英文名稱： 含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號抑制物盒蛋白家族9抗體 0.2ml
Anti-Phospho-HSP27 (Ser78)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化熱休克蛋白27抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Streptavidin/Gold 金標(biāo)記鏈霉親和素(10nm/15nm) 0.5ml
LGI3 英文名稱： Lgi3蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh DKK1 抑癌蛋白DKK1抗體 規(guī)格 0.2ml
CETP(Mouse cholest erolester transfer protein)ELISA Kit 小鼠膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
芐青霉素檢測試劑盒 96孔/盒 動物組織/水產(chǎn)/蜂蜜/奶
Anti-CLEC-2/CLEC1B/FITC 熒光素標(biāo)記C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族1成員B抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
CTX(Human Cyclophosphamide) ELISA Kit 人環(huán)磷酰胺Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-Melan-A/MART-1/Melanoma HMB45 黑色素瘤相關(guān)抗原/黑色素-A抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Rhesus antibody Rh ITPR2 5-三磷酸肌醇受體2抗體 規(guī)格 0.2ml
BP(Human Bullous Pemphigoid) ELISA Kit 人大皰性類天皰瘡抗體 96T
PP4R3B 英文名稱： 絲酸/蘇酸蛋白磷酸酶3B抗體 0.2ml
C22orf26 英文名稱： 22號染色體開放閱讀框26抗體 0.2ml
Anti-Melan-A/MART-1/Melanoma HMB45 黑色素瘤相關(guān)抗原/黑色素-A抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
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