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詳細(xì)介紹
放射抗拒性Lewis肺癌細(xì)胞株；R-LLC品牌懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
細(xì)胞名稱 放射抗拒性Lewis肺癌細(xì)胞株；R-LLC品牌
形態(tài)特性 上皮樣
品牌 貼壁生長
特征特性 該細(xì)胞屬專利保藏，其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS：
Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1：
3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 未定
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗(yàn))，晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-JNK1/3 /FITC 熒光素標(biāo)記c-Jun氨基末端激酶1/3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-Phospho-SHIP2 (Tyr580)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白酪氨酸磷酸酶2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh AMH/MIS Muellerian繆勒管激素抑制因子抗體 規(guī)格 0.2ml
Rabbit Anti-human sIgA/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的兔抗人分泌型IgA 0.1ml
GNG5 英文名稱： G蛋白γ5/Gγ5 抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-horse IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗馬IgG 規(guī)格 0.1ml
Anti-Phospho-SHIP2 (Tyr580)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白酪氨酸磷酸酶2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
mouae-VEGF-D 小鼠血管內(nèi)皮生長因子DMulti-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-Phospho-Ezrin (Thr567) 磷酸化埃茲蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Rhesus antibody Rh MRP2 多藥耐藥相關(guān)蛋白2抗體 規(guī)格 0.1ml
PP(Human placental protein) ELISA Kit 人胎盤蛋白 96T
SCXA 英文名稱： 堿性螺旋-環(huán)-螺旋轉(zhuǎn)錄因子SCXA抗體 0.2ml
C1ORF74 英文名稱： 1號染色體開放閱讀框74抗體 0.2ml
Anti-Phospho-Ezrin (Thr567) 磷酸化埃茲蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
SAA (Rabbit Serum amyloid A) ELISA Kit 兔血清淀粉樣蛋白A 96T
MMP-17 英文名稱： 基質(zhì)金屬蛋白酶-17抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh DRIP1/C14orf28 多巴胺受體相互作用蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml
cTn- I (Mouse cardiac troponin I ) ELISA Kit 小鼠心肌肌鈣蛋白ⅠMulti-class antibodies規(guī)格： 48T
ABCG1 英文名稱： 三磷酸腺苷結(jié)合盒亞家族G1抗體 0.1ml
Anti-CD44v4 /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠CD44V4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-GNRHR/FITC 熒光素標(biāo)記促性腺激素釋放激素受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-P19ARF/FITC 熒光素標(biāo)記p19ARF抑癌基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Beta-lactoglobulin β-乳球蛋白抗體 規(guī)格 1ml
CREB-1 (cAMP responsive element binding protein-1) 環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白(抗原) 0.5mg
Phospho-HDAC3 (Ser424) 英文名稱： 磷酸化組蛋白去乙?；?抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh RASGEF1A 鳥嘌呤核苷酸交換因子rasgef1a抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-P19ARF/FITC 熒光素標(biāo)記p19ARF抑癌基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
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