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技術(shù)文章

大鼠ELISA試劑盒使用說明書的各大分類

閱讀:858          發(fā)布時間:2020-9-9

樣本處理及要求:

1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

2.血漿:應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。

3.尿液:用無菌大鼠ELISA試劑盒管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入大鼠ELISA試劑盒一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上大鼠ELISA試劑盒待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

溫育:操作同3。

洗滌:操作同5。

顯色:每孔大鼠ELISA試劑盒先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

38002-18-5 炔雌醇相關(guān)物質(zhì)A標準品 20mg

536-33-4 乙硫異煙胺標準品 Ethionamide 200mg

1959/6/3 乙氧酰胺苯甲酯標準品 Ethopabate 125mg

4093-28-1 乙氧酰胺苯甲酯相關(guān)物質(zhì)A標準品 Ethopabate Related Compound A 25mg

77-67-8 乙琥胺標準品 Ethosuximide 500mg

86-35-1 乙苯妥英標準品 Ethotoin 200mg

452-35-7 乙氧苯噻唑胺標準品 Ethoxzolamide 200mg

141-78-6 乙酸乙酯標準品 Ethyl Acetate 1.2ml×3ampules" 

丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯共聚物水分散體標準品 " 1.5g

100-41-4 乙基苯標準品 Ethylbenzene 0.5ml×3ampules

 基本原理:

1、抗原或抗體能吸附到固相載體表面,并保持其免疫學活性;

2、抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結(jié)合物,仍保持其免疫學和酶學活性;

3、 酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定大鼠ELISA試劑盒是否有免疫反應(yīng)的存在,而且顏色反應(yīng)的深淺是與標本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例,因此,可以按底物顯色的程度顯示試驗結(jié)果。

 

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