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支原體污染的檢測(cè)及鑒定方法：

1、分離培養(yǎng)法

支原體的病原學(xué)檢測(cè)主要是從被污染的細(xì)胞、雞胚中分離培養(yǎng)出支原體來確定，分離培養(yǎng)法是檢測(cè)支原體污染中最為可靠準(zhǔn)確的方法。但是支原體對(duì)環(huán)境的影響敏感，容易被滅活，而且分離培養(yǎng)操作相對(duì)繁瑣，所需時(shí)間較長(zhǎng)，因此只能夠?qū)χгw污染進(jìn)行定性觀察。分離培養(yǎng)法在常規(guī)的支原體檢測(cè)中多用于輔助其它檢測(cè)方法。

2、DNA熒光染色法

DNA熒光染色法較分離培養(yǎng)法縮短了檢測(cè)周期，主要用于細(xì)胞培養(yǎng)中污染支原體的檢測(cè)。DNA熒光染色法正是利用熒光染色劑雙苯咪唑（Bisbenzimidzole）Hoechst33258能夠結(jié)合支原體DNA中的A-T堿基富集區(qū)域的原理，被支原體污染的細(xì)胞經(jīng)染色后，其細(xì)胞核外與細(xì)胞周圍可看到許多大小均一的熒光點(diǎn)，即是富含A-T堿基區(qū)域的支原體DNA。

3、PCR技術(shù)

PCR作為一種快速、靈敏、特異且簡(jiǎn)便的基因診斷技術(shù)已應(yīng)用于科學(xué)研究和疾病的診斷。根據(jù)支原體基因組內(nèi)的保守序列設(shè)計(jì)特異引物，對(duì)待檢樣品的核酸進(jìn)行擴(kuò)增，通過對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物的大小分析作出診斷。PCR檢測(cè)技術(shù)用于支原體污染的檢測(cè)，周期短、靈敏度高、特異性好、操作簡(jiǎn)單且一次可檢測(cè)大量樣品。

4、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

ELISA用于支原體污染的檢測(cè)中，有著良好的特異性和敏感性，一次可以完成大量樣品的檢測(cè)。如今已有LONZA等公司開發(fā)了針對(duì)細(xì)胞中污染支原體的檢測(cè)試劑盒，具有簡(jiǎn)便、快速與定量定性檢測(cè)等特點(diǎn)。

5、電鏡

一般在細(xì)胞培養(yǎng)48～72小時(shí)，細(xì)胞接近匯合前，用胰酶消化細(xì)胞制成細(xì)胞懸液后進(jìn)行固定、包埋、切片后才能進(jìn)行觀察。

6、定期檢測(cè)

支原體感染會(huì)使培養(yǎng)細(xì)胞慢慢枯萎，因此對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞定期進(jìn)行支原體檢測(cè)非常重要。一般來說每1至3個(gè)月就應(yīng)該進(jìn)行一次支原體檢測(cè)。將定期支原體檢測(cè)常規(guī)化堅(jiān)持下去，是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)支原體感染的關(guān)鍵。