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中和抗體ELISA檢測試劑盒實驗步驟
閱讀：303 發(fā)布時間：2023-1-10中和抗體ELISA檢測試劑盒利用競爭法ELISA原理，當(dāng)樣本中存在中和抗體時與刺突RBD蛋白結(jié)合，從而阻止了RBD與預(yù)包被板底的ACE2蛋白的結(jié)合，用于病毒中和抗體的定量檢測。
實驗步驟：
1.將100ul2 ug/ml ACE2加入至每孔，4℃孵育過夜；
2.第二天，50 ul稀釋好的樣本+50ul 刺突RBD蛋白混合后，室溫孵育2h；
3.包被后，移除孔中的ACE2蛋白，加入稀釋好的封閉液，室溫封閉1h；
4.移除孔中的封閉液，用200ul wash buffer洗滌一次；
5.將孵育好的樣本+刺突RBD蛋白混合液100ul加入孔中，37℃孵育2h；
6.移除孔中的樣本-刺突RBD蛋白混合液，用200ul wash buffer洗滌，洗4次；
7.每孔中加入100ul稀釋好的HRP標(biāo)記的抗兔Fc標(biāo)簽二抗，37℃孵育1h（由于刺突RBD蛋白是帶有兔Fc標(biāo)簽的，所以可以備該二抗特異性識別并結(jié)合）；
8.移除孔中的二抗，用200ul wash buffer洗滌，洗4次；
9.向每孔加入100ul TMB顯色液，輕輕混合，室溫孵育5min，每孔加入100ul終止液，輕輕混合，在450 nm波長下檢測吸光度。
標(biāo)準(zhǔn)曲線僅用于說明目的，不應(yīng)用于計算未知數(shù)。每次檢測時均應(yīng)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
（競爭法ELISA，微孔板中顏色的深淺與待測物的濃度呈負(fù)相關(guān)）