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技術(shù)文章

微生物培養(yǎng)基的操作步驟與注意事項(xiàng)

閱讀:489          發(fā)布時(shí)間:2023-11-6

培養(yǎng)基( culture medium)是人工配制的,適合微生物生長、分離鑒別的營養(yǎng)基礎(chǔ)。一般基礎(chǔ)培養(yǎng)基中古有蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉、氯化鈉、瓊脂等基本營養(yǎng)物質(zhì)。微生物培養(yǎng)基應(yīng)用范圍很廣。例如,無菌試驗(yàn)培養(yǎng)基可檢查藥品、生物制品是否污染細(xì)菌,它直接關(guān)系到人民用藥安全;在臨床及食品衛(wèi)生檢驗(yàn)中常用選擇、鑒別培養(yǎng)基,此類培養(yǎng)基中根據(jù)用途不同,需要加入抑菌劑、指示劑、血液、糖等試劑,以利于特定細(xì)菌的分離與鑒別,需要使細(xì)菌大量生長、繁殖的各類培養(yǎng)基;病毒培養(yǎng)及疫苗中則需用組織細(xì)胞培養(yǎng)液,主要成分為多種氨基酸、核苷酸、無機(jī)鹽、生長因子等。

 微生物培養(yǎng)基操作步驟:

1、準(zhǔn)確稱量試劑:根據(jù)不同的菌類和用途,選擇適宜的培養(yǎng)基,培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。

2、校正pH值:將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi),標(biāo)記劃線,加熱溶解,補(bǔ)充水分,測定酸堿度,常用pH6.8~8.0的精密試紙或酸度計(jì)測定。用1NNaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。

3、過濾:將玻璃漏斗置鐵架上,再用紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,將上述培養(yǎng)基倒入其中過濾至透明。

4、分裝:將過濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶內(nèi)(試管內(nèi)每支裝5mL;三角瓶中裝100~150ml),塞好棉塞用牛皮紙包扎好,準(zhǔn)備滅菌。

5、滅菌:培養(yǎng)基的滅菌,常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死,但細(xì)菌的芽胞有較強(qiáng)的抗熱性,須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達(dá)到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理,即壓力越大,蒸汽溫度就越高。因此,在同一溫度條件下,采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下,菌體吸收水分后,其蛋白質(zhì)易于凝固變性,因?yàn)檎羝拇┩噶?qiáng),殺菌效果好。

微生物培養(yǎng)基注意事項(xiàng):

1、根據(jù)不同微生物的營養(yǎng)需要配制不同的培養(yǎng)基。

2、注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度及合適配比,保持合適滲透壓。

3、將培養(yǎng)基的 pH 控制在適宜的范圍之內(nèi),以利于不同類型微生物的生長繁殖或代謝產(chǎn)物的積累。

4、要注意各種原料的配比,每種培養(yǎng)基的配比合適的配比,可以按照老師的要求去做。

5、如需要加熱的時(shí)候注意時(shí)間的把握。

 


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