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胎牛血清白蛋白（BSA）獲取途徑及其用途
閱讀：181 發(fā)布時(shí)間：2024-5-20胎牛血清白蛋白，英文名稱Bovine Serum Albumin（BSA），也稱Cohn Fraction V，是牛血清中的一種白蛋白，包含583個(gè)氨基酸殘基，分子量為66.430 kDa，等電點(diǎn)為4.7。牛血清白蛋白在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用，例如在western blot中作為Blocking agent;在酶切反應(yīng)緩沖液中加入BSA，通過提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度，對酶起保護(hù)作用。防止酶的分解和非特異性吸附，能減輕有些酶的變性，能減輕有些不利環(huán)境因素如加熱，表面張力及化學(xué)因素引起的變性。是胎牛血清中的一種球蛋白，一般獲取胎牛血清白蛋白，常常運(yùn)用的方法是加熱法。
下面一起來看看獲取胎牛血清白蛋白的。
一、所需材料
胎牛血清以檸檬酸三鈉為抗凝劑，血液搜集后隨即分別出血漿備用。需要的試劑有血清白蛋白；溴jia酚氯；醋酸纖維素薄膜，別的試劑均為分析純。獲取胎牛血清白蛋白需要準(zhǔn)備 LG-6型大容量冷凍離心機(jī)，DF-C型電泳儀，UV-754型紫外可見分光光度計(jì)，PHS-2型酸度計(jì)。
二、具體方法
白蛋白含量測定 選用溴jia酚氯法，以胎牛血清白蛋白為規(guī)范. 白蛋白純度的測定 選用醋酸纖維素薄膜電泳法。吸光度值的測定 用分光光度計(jì)直接測定蛋白質(zhì)溶液在波長為403 nm處的光吸收值，然后折算成濃度為10 g/L時(shí)牛血清白蛋白的光吸收值，用A403表明。
胎牛血清白蛋白的生產(chǎn)工藝 新鮮抗凝牛血用LC-6型大容量離心機(jī)(3 000 r/min×30 min)離心分別出血漿，加一定量的蒸餾水稀釋，再參與恰當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑和蛋白沉淀劑，然后按下述方法進(jìn)行試驗(yàn)處理：
1.不一樣pH值溶液對白蛋白的收率和質(zhì)量的影響 在其它條件固定的情況下，試驗(yàn)不一樣pH值對白蛋白的收率、純度及A403值的影響。
2.不一樣加熱保溫時(shí)間對白蛋白的收率和質(zhì)量的影響 在選定的pH值和其它條件固定的情況下，試驗(yàn)不一樣加熱保溫時(shí)間對白蛋白的收率、純度及A403值的影響。
3.不一樣稀釋倍數(shù)對白蛋白的收率和質(zhì)量的影響 在選定的pH值和保溫時(shí)間及其它條件固定的情況下，試驗(yàn)不一樣稀釋倍數(shù)對白蛋白的收率、純度及A403值的影響。
4.不一樣加熱溫度對白蛋白的收率和質(zhì)量的影響 在其它條件選定的情況下，試驗(yàn)不一樣加熱溫度對白蛋白的收率、純度及A403值的影響。
牛血清白蛋白BSA有著J其廣泛的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用，除在細(xì)胞培養(yǎng)中作為營養(yǎng)物添加外，牛血清白蛋白BSA主要還有以下用途：
1. 在酶切反應(yīng)體系中作穩(wěn)定劑，對酶起保護(hù)作用，并防止其分解和非特異性吸附；
2. 維持滲透壓、提供pH緩沖、起載體作用；
3. 作為蛋白定量檢測的標(biāo)準(zhǔn)品使用，如WB中的蛋白定量等；
4. 常規(guī)免疫實(shí)驗(yàn)中作封閉試劑使用，包括ELISA、WB和IHC等。
WB常規(guī)使用含蛋白比較全的脫脂奶粉來封閉，一般檢測磷酸化蛋白時(shí)更推薦用BSA（脫脂奶粉含有磷酸化蛋白可能會有干擾）；常規(guī)方法封閉效果不佳時(shí)也可考慮使用BSA封閉以進(jìn)行優(yōu)化。