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酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）簡述
閱讀：396 發(fā)布時(shí)間：2024-9-141971年瑞典學(xué)者Engvail和Perlmann,荷蘭學(xué)者Van Weerman和Schuurs分別報(bào)道將免疫技術(shù)發(fā)展為檢測體液中微量物質(zhì)的固相免疫測定方法，即酶聯(lián)免疫吸附測定法 (enzyme-linked immuno sorbent assay , ELISA) 。ELISA將抗原或抗體結(jié)合在固相載體表面，利用抗原抗體的特異性結(jié)合以及抗體或者抗原上標(biāo)記的酶催化特定底物發(fā)生顯色反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物檢測的免疫分析方法，可測至皮摩爾（pmol）級別。ELISA已成為分析化學(xué)領(lǐng)域中的前沿課題 ，它是一種特殊的試劑分析方法，是在免疫酶技術(shù)( immunoenzymatic techniques ) 的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術(shù) 。
一、基本原理
它采用抗原與抗體的特異反應(yīng)將待測物與酶連接，然后通過酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，用于定量測定。測定的對象可以是抗體也可以是抗原。
在這種測定方法中有3種必要的試劑:①固相的抗原或抗體(免疫吸附劑) ②酶標(biāo)記的抗原或抗體(標(biāo)記物)③酶作用的底物(顯色劑)。
測量時(shí)，抗原(抗體)先結(jié)合在固相載體上，但仍保留其免疫活性，然后加一種抗體(抗原)與酶結(jié)合成的偶聯(lián)物(標(biāo)記物)，此偶聯(lián)物仍保留其原免疫活性與酶活性，當(dāng)偶聯(lián)物與固相載體上的抗原(抗體)反應(yīng)結(jié)合后，再加上酶的相應(yīng)底物，即起催化水解或氧化還原反應(yīng)而呈顏色。
其所生成的顏色深淺與欲測的抗原(抗體)含量成正比。 這種有色產(chǎn)物可用肉眼、光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡觀察，也可以用分光光度計(jì)(酶標(biāo)儀)加以測定。其方法簡單，方便迅速，特異性強(qiáng)。
二、分類
該法由種類和變化可分為以下幾種:
(一)雙抗體夾心法
(二)間接法
(三)競爭法
(四)雙位點(diǎn)一步法
(五)捕獲法測IgM抗體
(六)應(yīng)用親和素和生物素的ELISA
三、特點(diǎn)
該法相較其他方法而言，有以下特點(diǎn)：
1. 靈敏性高
該測定法的靈敏度來自作為報(bào)告基團(tuán)的酶。酶是一種有機(jī)催化劑，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng) ，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。ELISA實(shí)現(xiàn)了在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平上示蹤抗原或抗體的所在部位，或在微克、甚至納克水平上對其進(jìn)行定量。
2. 特異性強(qiáng)
其特異性來自抗體或抗原的選擇性?？乖贵w的結(jié)合實(shí)質(zhì)上只發(fā)生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)之間。由于兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補(bǔ)關(guān)系，所以抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性。
注意事項(xiàng)：
1）正式試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高，說明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2）實(shí)驗(yàn)材料的保存比較重要，一般需要注意的點(diǎn)如下：
※ ELISA試劑盒一般是4℃保存，如果有溶解后的標(biāo)準(zhǔn)品次日需要使用，則需要-20℃，防止降解導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)；
※ 未使用的標(biāo)準(zhǔn)品與未用完的試劑盒一起保存，一般試劑盒拆分后建議一周內(nèi)使用，由于濕度等影響，長期放置易引起產(chǎn)品的不穩(wěn)定；
※ 對于洗滌，常規(guī)建議機(jī)洗，有些較為老款的洗板機(jī)由于時(shí)間較久，可能加液沖力較大或有固定的洗滌液，可能會(huì)導(dǎo)致結(jié)果異常，需慎重選擇；
※ ELISA試劑盒正式實(shí)驗(yàn)前，建議先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，避免出現(xiàn)濃度超出檢測限導(dǎo)致的結(jié)果無法使用的情況；
※ 各家試劑盒可能略有差異，使用前建議詳細(xì)閱讀說明書。