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詳細(xì)介紹
PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件:
鯉春病毒PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系
10×擴(kuò)增緩沖液 10ul
4種dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10～100pmol
模板DNA 0.1～2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加雙或三蒸水至 100ul
產(chǎn)品名稱 | 鯉春病毒PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格 |
規(guī)格 | 50T |
價(jià)格 | 電詢 |
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技術(shù)概論:
鯉春病毒PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期發(fā)展起來(lái)的體外核酸擴(kuò)增技術(shù)。它具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、易自動(dòng)化等突出優(yōu)點(diǎn)；能在一個(gè)試管內(nèi)將所要研究的目的基因或某一DNA片段于數(shù)小時(shí)內(nèi)擴(kuò)增至十萬(wàn)乃至百萬(wàn)倍,使肉眼能直接觀察和判斷；可從一根毛發(fā)、一滴血、甚至一個(gè)細(xì)胞中擴(kuò)增出足量的DNA供分析研究和檢測(cè)鑒定。過(guò)去幾天幾星期才能做到的事情，用PCR幾小時(shí)便可完成。PCR技術(shù)是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的一項(xiàng)革命性創(chuàng)舉和里程碑。
產(chǎn)品特點(diǎn):
鯉春病毒PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格PCR引物設(shè)計(jì)的目的是為了找到一對(duì)合適的核苷酸片段，使其能有效地?cái)U(kuò)增模板DNA序列。因此，引物的優(yōu)劣直接關(guān)系到PCR的特異性與成功與否。
要設(shè)計(jì)引物首先要找到DNA序列的保守區(qū)。同時(shí)應(yīng)預(yù)測(cè)將要擴(kuò)增的片段單鏈?zhǔn)欠裥纬啥?jí)結(jié)構(gòu)。如這個(gè)區(qū)域單鏈能形成二級(jí)結(jié)構(gòu)，就要避開它。如這一段不能形成二級(jí)結(jié)構(gòu)，那就可以在這一區(qū)域設(shè)計(jì)引物。
現(xiàn)在可以在這一保守區(qū)域里設(shè)計(jì)一對(duì)引物。一般引物長(zhǎng)度為15-30堿基，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為100-600堿基對(duì)。
讓我們先看看P1引物。一般引物序列中G+C含量一般為40%-60%。而且四種堿基的分布隨機(jī)。不要有聚嘌呤或聚嘧啶存在。否則P1引物設(shè)計(jì)的就不合理。應(yīng)重新尋找區(qū)域設(shè)計(jì)引物。
同時(shí)引物之間也不能有互補(bǔ)性，一般一對(duì)引物間不應(yīng)多于4個(gè)連續(xù)堿基的互補(bǔ)。
引物確定以后，可以對(duì)引物進(jìn)行必要的修飾，例如可以在引物的5′端加酶切位點(diǎn)序列；標(biāo)記生物素、熒光素、等，這對(duì)擴(kuò)增的特異性影響不大。但3′端不能進(jìn)行任何修飾，因?yàn)橐锏难由焓菑?′端開始的。這里還需提醒的是3′端不要終止于密碼子的第3位，因?yàn)槊艽a子第3位易發(fā)生簡(jiǎn)并，會(huì)影響擴(kuò)增的特異性與效率。
阪崎腸桿菌rpsU-dnaG 基因熒光PCR檢測(cè)試劑盒間序列(探針?lè)ǎ┚C上所述我們可以歸納十條PCR引物的設(shè)計(jì)原則：
1、鯉春病毒PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格引物應(yīng)用核酸系列保守區(qū)內(nèi)設(shè)計(jì)并具有特異性。
2、 產(chǎn)物不能形成二級(jí)結(jié)構(gòu)。
3、引物長(zhǎng)度一般在15~30堿基之間。
4、G+C含量在40%~60%之間。
5、堿基要隨機(jī)分布。
6、引物自身不能有連續(xù)4個(gè)堿基的互補(bǔ)。
7、引物之間不能有連續(xù)4個(gè)堿基的互補(bǔ)。
8、引物5′端可以修飾。
9、引物3′端不可修飾。
10、引物3′端要避開密碼子的第3位。
PCR引物設(shè)計(jì)的目的是找到一對(duì)合適的核苷酸片段，使其能有效地?cái)U(kuò)增模板DNA序列。如前述，引物的優(yōu)劣直接關(guān)系到PCR的特異性與成功與否。對(duì)引物的設(shè)計(jì)不可能有一種包羅萬(wàn)象的規(guī)則確保PCR的成功，但遵循某些原則，則有助于引物的設(shè)計(jì)。
小鼠癌細(xì)胞，4T1細(xì)胞1x10^6cells/T25培養(yǎng)瓶
小鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞，G422細(xì)胞1x10^6cells/T25培養(yǎng)瓶
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小鼠樹突狀細(xì)胞，DC2.4細(xì)胞1x10^6cells/T25培養(yǎng)瓶
兔支持細(xì)胞原代細(xì)胞*
兔骨骼肌成纖維細(xì)胞原代細(xì)胞原裝/進(jìn)口
兔骨骼肌細(xì)胞原代細(xì)胞
人腦膜細(xì)胞總RNAHMCtRNA*
人神經(jīng)元總RNAHNtRNA原裝/進(jìn)口
人小腦顆粒細(xì)胞總RNAHCGCtRNA
人海馬趾神經(jīng)細(xì)胞總RNAHN-htRNA*
人少突膠質(zhì)前體細(xì)胞總RNAHOPCtRNA原裝/進(jìn)口
鯉春病毒PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格Acenaphthylene苊烯 規(guī)格：>98.0%(T)
Diphenylguanidine二苯胍 規(guī)格：>98.0%(T)
13-Acetyl-9-dihydrobaccatinIII13-乙?；?9-羥基巴卡丁III 規(guī)格：>98.0%(T)
Dihydrotanshinone二氫丹參酮 規(guī)格：>98.0%(T)
Boronsolution硼標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000μg/ml,溶劑：水） 規(guī)格：>98.0%(T)
Boronsolution硼標(biāo)準(zhǔn)溶液（100µg/mL,基體：水） 規(guī)格：>98.0%(T)
Bismuthsolution鉍標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000μg/ml,溶劑:1.5mol/LHNO3） 規(guī)格：>98.0%(T)
Coppersolution銅標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000mg/l,溶劑：1%硫酸） 規(guī)格：>98.0%(T)
Coppersolution銅標(biāo)準(zhǔn)溶液（500mg/l,溶劑:1%硫酸） 規(guī)格：>98.0%(T)
Chromiumsolution鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液（三價(jià)鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液1000μg/ml） 規(guī)格：>98.0%(T)
Chromiumsolution鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液（500mg/L,溶劑：水） 規(guī)格：>98.0%(T)
Chromiumsolution鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液（100µg/mL,基體：水） 規(guī)格：>98.0%(T)
Cobaltstandard鈷標(biāo)準(zhǔn)溶液（500mg/L,溶劑：1%鹽酸） 規(guī)格：>98.0%(T)
Cobaltstandard鈷標(biāo)準(zhǔn)溶液（100(20℃)µg/mL,基體:1%HNO3） 規(guī)格：>98.0%(T)
Dysprosiumstandard鏑標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000μg/ml） 規(guī)格：>98.0%(T)
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