原理:
所謂實時熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法：
在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產物的形成*同步。

通用原則：
1，無乳鏈球菌探針法熒光定量PCR試劑盒先選擇好探針，然后設計引物使其盡可能的靠近于探針。
2， 擴增子的長度應不超過400bp，理想的能在100－150bp內，擴增片斷約短，有效的擴增反應就越容易獲得。較短的擴增片斷也容易保證分析的一致性
3， 保持GC含量在20％和80％之間，GC富含區(qū)容易產生非特異反應，從而會導致擴增效率的降低，及在SG分析中非特異信號。
4， 為了保證效率和重復性，應避免重復的核苷酸序列，尤其是G（不能有4個連續(xù)的G）
5， 將引物和探針互相進行配對檢測，以避免二聚體和發(fā)卡結構的形成。
b），探針設計指導
1，在設計引物之前設計探針
2，探針的Tm值應在68－70℃之間，如果是目測探針，則要仔細審查GC富含區(qū)。
3，探針的5’端要避免有鳥氨酸，5’G會有淬滅作用，即使被切割下來這種淬滅作用也還會存在
4，選擇C多于G的鏈作探針，G的含量多于C會降低反應效率，這時就應選擇配對的另一條鏈作為探針。
6， 探針應盡可能的短，不要超過30個bp。
7， 檢測探針的DNA折疊和二級結構。
服務流程:
1.客戶認真寫好訂單，提供待檢基因相關信息；
2.簽訂技術服務合同，支付預付款（30-50%)；
3.設計合成定量PCR引物（或客戶提供文獻引物委托本公司合成）；
4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反轉錄；
5.PCR預實驗，主要檢測引物的特異性和擴增效率；
6.正式定量實驗：對所有樣品上機檢測；
7.實驗結果和數(shù)據(jù)分析，形成報告。

以下是公司*產品：

N,N,N',N'-四基-O-(N-琥珀酸亞胺基)脲六氟磷酸鹽人載脂蛋白B(Apo-B)CLIA試劑盒

N,N,N',N'-四基-S-(1-氧代-2-吡啶基)硫脲鎓六氟磷酸鹽人β抑制蛋白2(ARRB2)CLIA試劑盒

N,N,N',N'-四基-S-(1-氧代-2-吡啶基)硫脲鎓六氟磷酸鹽人載脂蛋白C2(Apo C2)CLIA試劑盒

N,N,N',N'-四基-S-(1-氧代-2-吡啶基)硫脲鎓六氟磷酸鹽人金屬肽酶含血小板反應蛋白7(ADAMTS7)CLIA試劑盒

對苯二酸單酯人12-脂氧化酶/脂加氧酶(LOX-12)CLIA試劑盒

對苯二酸單酯人載脂蛋白A4(apo-A4)CLIA試劑盒

對苯二酸單酯人金屬肽酶含血小板反應蛋白1(ADAMTS1) CLIA試劑盒

苯基-2-磺酰三硝基三氮唑人晚期糖基化終末產物受體(RAGE/AGER)CLIA試劑盒

苯基-2-磺酰三硝基三氮唑人5-羥色胺-N-?；D移酶(AA-NAT)CLIA試劑盒

苯基-2-磺酰三硝基三氮唑人DNA(無嘌呤/無嘧啶堿基位點)裂解酶（APEX1）CLIA試劑盒棕鱗矢車菊黃酮素Dansyl cadaverine [5-Dimethylaminonaphthalene-1-(N-(5-aminopentyl))sulfonamide]  

反式-可母尼醇，濕地松醇Dansyl chloride [5-Dimethylaminonaphthalene-1-sulfonyl chloride]  

靈芝酸SDansyl-X, acid

靈芝萜酮二醇Dansyl-X, SE [6-((5-dimethylaminonaphthalene-1-sulfonyl)amino)hexanoic acid, succinimidyl ester]  

6-(beta-D-吡喃葡萄糖氧基)水楊酸酯Fluorescamine  

1-咖啡酰奎寧酸NBD-F [4-Fluoro-7-nitrobenzofurazan]  

DL-薄荷醇NBD-Cl [4-Chloro-7-nitrobenzofurazan]

防己諾林堿; 粉防己素; 漢防己素; 去粉防己堿NBD-X [6-(N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino)hexanoic acid]

(+)-花旗松素NBD-X, SE [succinimidyl 6-(N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino)hexanoate]

雙去氧基姜黃素Super Fluor 488

產品特點：

    全新的熱啟動DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶，可在PCR反應的過程中抑制非特異擴增，從而最大限度地減少非特異性擴增產物的產生，提高熒光定量PCR反應的特異性；
    采用新型的熒光染料EvaGreen，與傳統(tǒng)熒光染料相比，對PCR反應抑制更小，而且熒光信號更強，檢測靈敏度更高；
    含有UNG的試劑盒可以防止PCR產物污染體系，進而有效防止實驗過程中PCR產物的交叉污染；
TaqMan熒光定量PCR試劑盒提供了除引物、探針、模板外的所有實驗所需組分，并配備2×Buffer，可完成不同類型熒光探針的實時熒光定量PCR反應，方便用戶使用；
    試劑盒的通用性強，可適用于Roche的Light Cycler、ABI各型實時熒光定量PCR儀和。