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賽爾瑞成（北京）生命科學(xué)技術(shù)有限公司
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大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)是使用很廣泛的蛋白質(zhì)表達(dá)系統(tǒng)，擁有遺傳背景清楚、表達(dá)水平高、操作簡單、培養(yǎng)周期短等優(yōu)點(diǎn)，市售的大約30%的重組蛋白產(chǎn)品都是由大腸桿菌系統(tǒng)生產(chǎn)而來。
應(yīng)用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)時(shí)，為了得到符合科研和產(chǎn)業(yè)需求的重組蛋白目標(biāo)產(chǎn)物，往往需要進(jìn)行目標(biāo)蛋白基因或菌種的突變，進(jìn)行大量且繁瑣的表達(dá)菌種和高表達(dá)蛋白突變體的篩選工作。大腸桿菌作為宿主菌，表達(dá)的蛋白定位為胞內(nèi)、胞外和周質(zhì)腔三種。為獲得胞內(nèi)蛋白或周質(zhì)腔蛋白，往往需要對(duì)大腸桿菌進(jìn)行破碎。雖然胞外蛋白可以借助信號(hào)肽的引導(dǎo)分泌到胞外，但蛋白的分泌效率通常不高，且很多時(shí)候，發(fā)酵中后期目標(biāo)蛋白才開始運(yùn)輸?shù)桨猓瑢?dǎo)致絕大多數(shù)蛋白仍儲(chǔ)存在胞內(nèi)，所以在進(jìn)行蛋白制備時(shí)，為提高蛋白收率，仍需要進(jìn)行細(xì)胞破碎。因此，破碎細(xì)胞是高通量篩選大腸桿菌菌種時(shí)必需的環(huán)節(jié)。
目前常用的破碎細(xì)胞的方法有超聲、均質(zhì)機(jī)壓力、溶菌酶、反復(fù)冷凍、化學(xué)試劑等，但是這些方法不同程度存在破碎效率低、成本高、周期長、細(xì)胞破碎不均一等的缺點(diǎn)。賽爾瑞成開發(fā)的大腸桿菌專用破菌液，能夠高效、簡便的對(duì)大腸桿菌進(jìn)行細(xì)胞破碎，特別適用于需要細(xì)胞破碎的高通量篩選。
★ 產(chǎn)品優(yōu)勢
1. 原位破菌，使用便捷，篩選成本更低
原位收集菌體，原位破菌，高通量操作。適用于各種型號(hào)培養(yǎng)板（如96孔板、48孔板、6孔板等），節(jié)省儀器成本、人力成本，節(jié)約時(shí)間，方便操作。
2. 組成成分溫和
不含還原劑、強(qiáng)變性劑、離子型去污劑等烈性成分，對(duì)絕大多數(shù)蛋白結(jié)構(gòu)和活性無影響。
★ 使用方法
1. 按常規(guī)方法，在培養(yǎng)板（如96孔板、48孔板、24孔板等）中接種培養(yǎng)大腸桿菌，至蛋白表達(dá)完成，即可使用孔板離心機(jī)離心收菌，棄去上清，盡量去除干凈；
2. 只需將孔板中收集的菌體按照孔板體積的五分之一左右加入破菌液，簡單混勻，置于-20°C以下冰箱，待冷凍結(jié)實(shí)。需要破菌時(shí)取出室溫自然解凍充分，然后按常規(guī)方法高速冷凍離心，收取破菌上清和菌體沉淀。
