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淺析圓筒實(shí)驗(yàn)（cylinder test）的測(cè)試方法及注意事項(xiàng)
閱讀：1400 發(fā)布時(shí)間：2022-6-1圓筒實(shí)驗(yàn)（cylinder test）主要針對(duì)不對(duì)稱中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，如帕金森病、阿爾茨海默病、腦卒中等，研究大鼠在貼壁站立過程中前肢的對(duì)稱性和使用率。實(shí)驗(yàn)將大鼠置于一個(gè)透明的樹脂玻璃圓筒中3～10 min，攝像記錄其活動(dòng)情況。圓筒的形狀能夠刺激大鼠用前肢垂直探索筒壁，記錄3 min內(nèi)大鼠后肢站立時(shí)前肢最初承重觸及筒壁的次數(shù)，并分別記錄左、右側(cè)觸及和雙側(cè)觸及的次數(shù)。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，大鼠在局灶性腦缺血后，在圓筒實(shí)驗(yàn)中前肢的使用情況具有不對(duì)稱性，且在前肢垂直探索筒壁的過程中，更傾向于使用正常前肢。
實(shí)驗(yàn)方法
實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
最好在小鼠活躍期（暗循環(huán)）進(jìn)行圓筒測(cè)試。
注意：將所有測(cè)試的小鼠保持在反向光/暗循環(huán)上很方便。在實(shí)驗(yàn)前一天用防水記號(hào)筆標(biāo)記老鼠的尾巴，這樣可以快速識(shí)別籠中的小鼠，并在測(cè)試前盡量避免高水平的壓力。
在一天中的同一時(shí)間進(jìn)行所有行為評(píng)估。
將圓筒放在桌子或?qū)嶒?yàn)室工作臺(tái)的中心。使用黑色窗簾覆蓋圓柱體的所有側(cè)面，以盡量減少對(duì)老鼠的視覺干擾。
注意：在圓筒所在的表面上畫一條線，以確保圓筒可以返回到相同的位置。在弱光條件下進(jìn)行測(cè)試。黑暗的環(huán)境會(huì)激發(fā)老鼠的探索本能。在我們的動(dòng)物設(shè)施中，我們使用天花板白光作為主要照明源。該光源由調(diào)光開關(guān)控制，可在圓柱體上方提供 40 勒克斯。
注意：確保照明條件足以清楚地看到視頻記錄中圓柱體周圍的前肢使用情況。在測(cè)試前讓老鼠適應(yīng)測(cè)試室至少 30 分鐘。提供與測(cè)試相同的光照條件。讓老鼠不受干擾地休息。
行為分析
開始錄像。
用動(dòng)物識(shí)別標(biāo)記測(cè)試卡并記錄 3 秒。
將老鼠放入玻璃圓柱體的中間并啟動(dòng)計(jì)時(shí)器（下圖）。
記錄小鼠 10 分鐘。在測(cè)試結(jié)束時(shí)，立即將鼠標(biāo)放回其家籠。
用肥皂和水清潔氣缸。
用 70% 乙醇噴灑圓筒以去除任何氣味痕跡。
在下一次測(cè)試之前讓玻璃圓筒干燥。
對(duì)所有測(cè)試的小鼠重復(fù)步驟 。?
將所有老鼠送回鼠籠。
數(shù)據(jù)分析
計(jì)算右爪、左爪或雙爪的觸壁次數(shù)（同時(shí)雙爪接觸）；
將數(shù)據(jù)表達(dá)為受損前肢相對(duì)于總接觸的百分比 [(對(duì)側(cè)觸摸)/(同側(cè)觸摸 + 對(duì)側(cè)觸摸) x 100]；
注意事項(xiàng)
玻璃圓筒的大小可能會(huì)根據(jù)小鼠品系的大小而有所不同。更大或更活躍的應(yīng)變可以通過跳到氣缸的邊緣來試圖逃脫。在這種情況下，應(yīng)使用更高的氣缸。我們?cè)诒緟f(xié)議中使用的氣缸適用于 C57BL/6 小鼠。
一些研究人員使用放置在圓柱體旁邊的鏡子來確保在視頻記錄中看到前肢。
在測(cè)試之前不要使小鼠習(xí)慣于氣缸。這可能導(dǎo)致老鼠很少或沒有探索的傾向。
試驗(yàn)持續(xù)時(shí)間因方案而異。5 到 10 分鐘的試驗(yàn)足以獲得足夠數(shù)量的運(yùn)動(dòng)以進(jìn)行可靠測(cè)量。在這段時(shí)間之后，大多數(shù)老鼠都不太活躍。
最好在隔音室中進(jìn)行此測(cè)試，因?yàn)榇舐暤脑胍魰?huì)分散鼠標(biāo)的注意力。如果無法做到這一點(diǎn)，請(qǐng)?jiān)陂T和附近區(qū)域添加一個(gè)顯示“正在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)"的標(biāo)志，以消除任何對(duì)話。?
大多數(shù)研究通常每組使用 8 到 10 只小鼠。
進(jìn)行行為分析的實(shí)驗(yàn)人員不應(yīng)該對(duì)被小鼠可見。