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技術(shù)文章

細(xì)胞的說明培養(yǎng)流程和注意事項(xiàng)

閱讀:2185          發(fā)布時間:2018-11-20

細(xì)胞接收后的操作流程與注意事項(xiàng)

1. 細(xì)胞收到后建議在培養(yǎng)箱穩(wěn)定4小時左右再依據(jù)細(xì)胞密度,換液培養(yǎng)或傳代。

2. 如果細(xì)胞為貼壁細(xì)胞,而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài),請將懸浮的細(xì)胞及時離心,加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶中繼續(xù)培養(yǎng)3天;同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基,培養(yǎng)2-3天。若3天后細(xì)胞都沒有出現(xiàn)增殖而是繼續(xù)脫落死亡,請及時聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室,技術(shù)人員會跟進(jìn)解決。

3. 貼壁細(xì)胞生長緩慢:適當(dāng)提高血清濃度(高不超過20%),或可根據(jù)該細(xì)胞生長密度,考慮胰酶消化后,轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)。

4. 生長不均:貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)生長不均,成島狀生長,可將細(xì)胞進(jìn)行消化,重新打散細(xì)胞,加入新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

 

細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程(請嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作)

1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液潤洗細(xì)胞兩次,加2~3 ml 0.25% EDTA的胰酶消化(注意把握消化時間,通??刂圃?~2min)。

2. 鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁運(yùn)動時(不建議消化到細(xì)胞漂?。┤サ粢让福?~8ml *培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落、吹散。

3. 取出部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 注意培養(yǎng)基PH值變化情況,定期換液,待細(xì)胞密度達(dá)到70-80%時重復(fù)傳代操作或者凍存。

 

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