產(chǎn)品簡(jiǎn)介

  大腸桿菌經(jīng)Ca離子處理后可攝取外源DNA（Plasmid、Phage DNA），處于這種狀態(tài)的細(xì)胞稱(chēng)作感受態(tài)細(xì)胞（Competent Cells）。在進(jìn)行基因重組實(shí)驗(yàn)時(shí)，使用感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)應(yīng)用十分廣泛。制作基因文庫(kù)、重組質(zhì)粒體以及進(jìn)行亞克隆實(shí)驗(yàn)時(shí)，特別是在目的基因含量十分低的情況時(shí)，使用的感受態(tài)細(xì)胞十分重要。本公司生產(chǎn)的感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，長(zhǎng)期以來(lái)備受廣大客戶(hù)的喜愛(ài)，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC57質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)107～108，在-70℃下保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

使用方法

  1.將100μl感受態(tài)細(xì)胞于冰上解凍。應(yīng)注意所用DNA體積不要超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。

  2.取5μl連接產(chǎn)物加入到感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕旋轉(zhuǎn)幾次以混勻內(nèi)容物。在冰上放置30min。

  3.將管放入預(yù)加溫到42℃的水浴中，熱激90秒。快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細(xì)胞冷卻2～3min。該過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。

  4.每管中加900μl LB(SOC)培養(yǎng)基(不含抗生素)，37℃振蕩培養(yǎng)1h。目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。

  5.室溫4,000rpm離心5min，棄去900μl上清后，用剩余100μl培養(yǎng)基重懸細(xì)胞并涂布到含相應(yīng)抗性的LB瓊脂平板或含X-gal、IPTG、相應(yīng)抗性的LB瓊脂平板表面。注意：細(xì)胞用量應(yīng)根據(jù)連接效率和感受態(tài)細(xì)胞的效率進(jìn)行調(diào)整。

  6.將平板置于室溫直至液體被吸收。

  7.倒置平皿，于37℃培養(yǎng)，12～16h后可出現(xiàn)菌落。

儲(chǔ)存條件
  -70℃凍存

注意事項(xiàng)

  1.感受態(tài)應(yīng)保存在-70℃，不可多次凍融和放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

  2.進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí)，應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無(wú)菌條件的要求進(jìn)行。

  3.為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接反應(yīng)液，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到低。

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