產品規(guī)格

JM110：                                                     100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質期)：                            -80℃（6個月） 

基因型

rpsL (Str^R) thr leu thi-1 lacY galK galT ara tonA tsx dam dcm supE44 Δ(lac-proAB) /F′ [traD36 proAB lacI^qlacZΔM15] 

產品說明

JM110菌株具有硫酸鏈霉素抗性(Str^R)；是甲基化基因dam、dcm缺失的菌株，提取得到的質粒DNA，可被對dam、dcm甲基化敏感的內切酶切割；lacI^qlacZΔM15的存在使JM110可以進行藍白斑篩選，但轉化效率不高，一般不用于質粒構建，只適用于質粒轉化。JM110感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19 質粒檢測轉化效率約10⁷ cfu/μg DNA。

操作方法

1. JM110感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質粒或連接產物）并用EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3.向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意事項

1. 感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入質粒時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質?？上鄳獪p少終用于涂板的菌量。