ER2566 感受態(tài)細(xì)胞基因型:

F^- λ- fhuA2[lon] ompT lacZ::T7gene1 gal sulA11Δ(mcrC-mrr)114::IS10R(mcr-73::miniTn10-TetS)2 R(zgb-210::Tn10)(TetS) endA1 [dcm]

ER2566 感受態(tài)細(xì)胞簡(jiǎn)要說(shuō)明：

 High5^TM系列 ER2566感受態(tài)細(xì)胞為lon 和 ompT蛋白酶缺陷菌株。

膜外蛋白酶OMPT的缺失能夠有效防止表達(dá)的異源目的蛋白在細(xì)菌體內(nèi)的降解。

 High5^TM系列 ER2566感受態(tài)細(xì)胞采用特殊化學(xué)試劑制作，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率達(dá)10⁸cfu/μg。

ER2566 感受態(tài)細(xì)胞操作說(shuō)明：

1. 取100μl冰上融化的ER2566感受態(tài)細(xì)胞，加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基(2YT或LB)，混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。

ER2566 感受態(tài)細(xì)胞注意事項(xiàng)：

1.  感受態(tài)細(xì)胞在冰上融化。

2. 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。

4. 誘導(dǎo)時(shí)，IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。

5. 為獲得需要量的蛋白，誘導(dǎo)時(shí)間，溫度，IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。

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