DH10B 電擊感受態(tài)細(xì)胞
DH10B Electroporation-Competent Cell

DH10B 電擊感受態(tài)細(xì)胞基因型：

F- mcrA (mrr-hsdRMS-mcrBC) 80lacZM15 lacX74 recA1 endA1 araD139 (ara, leu)7697 galE15 g alK λ- rpsL nupG

DH10B 電擊感受態(tài)細(xì)胞簡要說明：

 High5TM 系列 DH10B 感受態(tài)細(xì)胞只能用于電擊轉(zhuǎn)化而不能用于熱激轉(zhuǎn)化。
 DH10B 菌株來源于 MC1061 菌株，mcrA、mcrBC 及 mrr 突變使 DH10B 菌株適合于克隆富 含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA (無論真核生物還是原核生物的基因組 DNA 都能被高效的轉(zhuǎn)入 DH10B 中)。recA1 和 endA1 的突變有利于插入 DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒 DNA 的提取。 φ80dlacZ?M15 標(biāo)記的存在使 DH10B 可用于藍(lán)白斑篩選，rpsL 賦予其鏈霉素抗High5TM 系列 DH10B 感受態(tài)細(xì)胞適用于大質(zhì)粒的構(gòu)建或者各種文庫構(gòu)建。High5TM 系 列 DH10B 感 受 態(tài) 細(xì) 胞 經(jīng) 特 殊 工 藝 制 作 ， 經(jīng) pUC19 質(zhì) 粒 檢 測 ， 轉(zhuǎn) 化 效 率>1010cfu/μg。
   DH10B 電擊感受態(tài)細(xì)胞操作說明：
1. 0.1cm 電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上 5 分鐘，待其瀝干水分，正置 5 分鐘，使
乙醇充分揮發(fā)，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中，壓實冰面，電極杯頂離冰面 0.5 cm 以方便蓋上杯蓋，
冰中靜置 5 分鐘充分降溫。
2. 取-80℃保存的  High5TM 系列 DH10B 感受態(tài)細(xì)胞放入冰浴中融化，加入 1 μl 目的 DNA (質(zhì) 粒或連接產(chǎn)物)并用手 EP 管底輕輕混勻立即插入冰中。
A. 測定轉(zhuǎn)化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的對照質(zhì)粒 pUC19；
B. 對于連接產(chǎn)物，請用乙醇沉淀 DNA 后適量 TE 緩沖液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重 懸，保證 DNA 濃度不超過 100 ng/μl。
3. 用 200 μl 槍頭將感受態(tài)-質(zhì)?；旌衔锟焖僖频诫姄舯?，避免產(chǎn)生氣泡，蓋上杯蓋。
4. 啟動電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 Ω，V=2.4 kV (此為 BioRad 電轉(zhuǎn)儀推薦參數(shù)，使用者也 可按所用電轉(zhuǎn)儀推薦的參數(shù)操作），將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中，電擊完成快速插入冰中。
5. 向電擊杯中加入 700 μl 不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 S.O.C.，混勻后轉(zhuǎn)移到空 EP 管中，37℃，200 rpm
復(fù)蘇 60 分鐘。
6. 5000rpm 離心一分鐘收菌，重懸后取 100-200 μl 涂布到含相應(yīng)抗生素的 2YT 或 LB 培養(yǎng)基上。將平 板倒置放于 37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放 37℃培養(yǎng)至少 13h。
  DH10B 電擊感受態(tài)細(xì)胞注意事項：

1.  加入質(zhì)粒時體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的 1/10。
2.  當(dāng)質(zhì)粒不純或存在鹽，乙醇，蛋白及緩沖液等污染時，轉(zhuǎn)化效率急劇下降。
3.    若轉(zhuǎn)化大質(zhì)?；蛳氆@得較高轉(zhuǎn)化效率，推薦使用高純質(zhì)粒提取試劑盒提取質(zhì)粒。質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn) 化效率下降一個數(shù)量級。
4. 對于連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化前用乙醇沉淀 DNA 后適量 TE 緩沖液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重懸產(chǎn)物，保證 DNA 濃度不超過 100 ng/μl。過高濃度連接產(chǎn)物或過大體積連接產(chǎn)物會降低轉(zhuǎn)化 效率，增加打火的風(fēng)險。
5.  混入質(zhì)粒時應(yīng)輕柔操作。
6.  轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。
 

  DH10B 電擊感受態(tài)細(xì)胞其他推薦：
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