| 貨號(hào)： | CM-6013K |
| 供應(yīng)商： | 上海淳麥 |
| 數(shù)量： | 1000只 |
| 英文名： | XL10-GoldChemically Competent Cell |
| 保質(zhì)期： | 1年 |
| 保存條件： | 零下80度 |
| 規(guī)格： | 20*100ul |
XL10-Gold感受態(tài)細(xì)胞
| XL10-Gold | |
| pUC19（control vector） | 10pg/μl 10μl |
XL10-Gold感受態(tài)細(xì)胞基因型：
TetrΔ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac Hte[F´proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr) Amy Camr]
XL10-Gold感受態(tài)細(xì)胞簡(jiǎn)要說明：
XL10-Gold是目前轉(zhuǎn)化效率最高的感受態(tài)細(xì)胞，由Stratagene開發(fā)的特異性用于大質(zhì)粒或珍貴連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化或構(gòu)建文庫(kù)的超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞。 XL10-Gold菌株為Hte(high transformation efficiency)基因型，Hte是Stratagene開發(fā)的特異性提高感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率及大質(zhì)粒轉(zhuǎn)化能力的宿主菌基因型，已成功應(yīng)用于40kd質(zhì)粒的構(gòu)建。[Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173]賦予XL10-Gold缺失幾乎所有已知的限制酶切系統(tǒng)；同時(shí)缺失核酸內(nèi)切酶(endA)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型(recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩(wěn)定性；Tetr， Camr賦予菌株四環(huán)素和氯霉素抗性；lacIqZΔM15的存在使XL10-Gold可用于藍(lán)、白斑篩選。
XL10-Gold感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>2×109cfu/μg。
XL10-Gold感受態(tài)細(xì)胞操作說明：
- XL10-Gold感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插入冰中），加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激35秒（非常重要——Efficiency decreases sharply when cells are heat-pulsed for <30 seconds or for >40 seconds.），迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
- 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。
XL10-Gold感受態(tài)細(xì)胞注意事項(xiàng)
- 感受態(tài)細(xì)胞在冰上融化。
- 混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
- 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
- XL10-Gold菌株對(duì) <40 µg/ml氯霉素有抗性，但對(duì)100 µg/ml氯霉素敏感。
- XL10-Gold感受態(tài)細(xì)胞采用常規(guī)轉(zhuǎn)化方法，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)2×109cfu/μg ；
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