Stable
Stable Chemically Competent Cell
產(chǎn)品規(guī)格:

Stable感受態(tài)細胞基因型:

F' proA+B+ lacIq  ?(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR)  ?(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ?lacX74 galK16 galE15

e14- Φ80dlacZ?M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR) rph spoT1 ?(mrr-hsdRMS -mcrBC)

Stable感受態(tài)細胞簡要說明：

Stable 菌株是 NEB 公司開發(fā)的高轉(zhuǎn)化效率菌株，是逆轉(zhuǎn)錄病毒/慢病毒載體系統(tǒng)推薦使用的菌株，具有與 Stbl2，Stbl3 *不同的基因型，但是表現(xiàn)出比 Stbl2，Stbl3 更優(yōu)異的性能，特別適合慢病毒或具有末端重復(fù)序列 DNA** 片段的克 隆?；蚪M含有重組酶 recA1 rel A1 突變，可有效抑制長片段末端重復(fù)區(qū)的重組，降低錯誤重組的概率；同時含有核 酸酶 endA1 突變，避免了提取質(zhì)粒過程中核酸酶的污染，大大提高了高純度病毒質(zhì)粒的產(chǎn)量和質(zhì)量。- -
-CMbio-lacZΔM15 的存在使 Stable 可用于藍、白斑篩選，此菌株具有四環(huán)素和鏈霉素抗性，Stable 感受態(tài)細 胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19 檢測轉(zhuǎn)化效率>5×108 cfu/μg DNA。
Stable感受態(tài)細胞操作說明
1. Stable 感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，6 分鐘后待菌塊融化，加入目的 DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手

 EP 管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置 25 分鐘。-CMbio-

2. 42℃水浴熱激 45 秒，迅速放回冰上并靜置 5 分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。-CMbio-

3. 向離心管中加入 0.9 mL 室溫 S.O.C.或 LB 培養(yǎng)基(S.O.C.營養(yǎng)豐富，可提高轉(zhuǎn)化效率)。-CMbio-

4. 37℃，225 rpm 復(fù)蘇 60 分鐘或 30℃，225 rpm 復(fù)蘇 90 分鐘。 (當(dāng)質(zhì)粒中含有不穩(wěn)定片段時，30℃培養(yǎng)可降低錯 誤重組的概率，若轉(zhuǎn)化 control pUC19 計算轉(zhuǎn)化效率，則需 37℃，225 rpm 復(fù)蘇 60 分鐘）-CMbio-
5. 5000rpm 離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的 S.O.C.或 LB 培養(yǎng)基 上。
6. 將平板倒置放于 37℃或 30℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。 (當(dāng)質(zhì)粒中含有不穩(wěn)定片段時，30℃培養(yǎng)可降低錯誤重組的概率， 若轉(zhuǎn)化 control pUC19 計算轉(zhuǎn)化效率，則需 37℃培養(yǎng)過夜)。
Stable感受態(tài)細胞優(yōu)點應(yīng)用：
1. Stable 菌株與 Stbl3 相比，基因組含有 endA 突變，提高了病毒質(zhì)粒的產(chǎn)量和純度。-CMbio- 2. Stable 菌株比 Stbl3 生長速度快，倍增時間是 Stbl3 的 1.5 倍。-CMbio-
3. . Stable 菌株基因組中含有 fhuA 突變，賦予其對噬菌體 T1 的抗性。-CMbio-

4. Stable 菌株具有較高的轉(zhuǎn)化效率，pUC19 檢測轉(zhuǎn)化效率>5×108 cfu/μg DNA。

5. Stable 菌株基因組中含有 lacZΔM15，可用于藍白斑篩選實驗。-CMbio-

6. Stable 菌株特別適合于不穩(wěn)定 DNA 的克隆，及逆轉(zhuǎn)錄病毒/慢病毒載體的構(gòu)建和擴繁。
Stable感受態(tài)細胞注意事項：

1. 對不穩(wěn)定 DNA 的克隆或逆轉(zhuǎn)錄病毒/慢病毒載體的構(gòu)建，涂板后平板應(yīng)在 30℃培養(yǎng)，以減少發(fā)生錯誤重組的 概率。-CMbio-
2. 制備高純度病毒質(zhì)粒時，應(yīng)使用新鮮轉(zhuǎn)化的平板接菌，新鮮菌液提取質(zhì)粒，菌液不可低溫保存后使用。

3. 對不穩(wěn)定的克隆或病毒質(zhì)粒優(yōu)先以質(zhì)粒狀態(tài)保存，盡量避免將質(zhì)粒保存在大腸桿菌細胞中。-CMbio-

4. 感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化。插入冰中 10 分鐘內(nèi)加入目標(biāo) DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降

低轉(zhuǎn)化效率。混入目的 DNA 時應(yīng)輕柔操作。-CMbio-

5. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。-CMbio-