*0F`感受態(tài)細(xì)胞

*0F` Chemically Competent Cell
產(chǎn)品規(guī)格:

      
*0F`感受態(tài)細(xì)胞基因組:
F´{lacI<sup>q</sup> Tn10 (TetR)} mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZ?M15 ?lacX74 recA1araD139 ?(ara-leu)7697 galU galK rpsL endA1 nupG
*0F`感受態(tài)細(xì)胞背景說(shuō)明：
   CMbio *0F`菌株來(lái)源于*0菌株。將F`{lacIq Tn10 (TetR)}因子轉(zhuǎn)入*0菌株，即為*0F`。該F`因子攜帶lacI^q 抑制子，可抑制trc，tac，lac等啟動(dòng)子下游基因的表達(dá)，從而可以用于一些表達(dá)毒性蛋白質(zhì)粒的擴(kuò)繁。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。CMbio *0F 可用于構(gòu)建克隆，藍(lán)白斑篩選（如用于藍(lán)白斑篩選，需在培養(yǎng)基中加入IPTG誘導(dǎo)β-半乳糖苷酶基因的表達(dá)）實(shí)驗(yàn)，具有四環(huán)素抗性。CMbio High5^TM系列*0F`感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>10<sup>7</sup>cfu/μg。
*0F`感受態(tài)細(xì)胞操作使用：

1. CMbio *0F`感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激60秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3.  向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng) 抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.  將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱12-16h，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性小菌落。

*0F`感受態(tài)細(xì)胞注意事項(xiàng)：

1.  CMbio 感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí) 間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2.  混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。