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THLE-2人肝永生化細(xì)胞上海淳麥生物科技有限公司是一家專注于研發(fā)和生產(chǎn)免疫細(xì)胞及干細(xì)胞相關(guān)產(chǎn)品的生物高科技企業(yè)，致力于打造國(guó)內(nèi)原代細(xì)胞研發(fā)和服務(wù)平臺(tái)，做“您身邊的細(xì)胞培養(yǎng)專家“。產(chǎn)品涵蓋免疫細(xì)胞及干細(xì)HFF-1 人包皮成纖維細(xì)胞胞、細(xì)胞系、*培養(yǎng)基、無(wú)血清培養(yǎng)基、基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清、轉(zhuǎn)染試劑、胰酶等細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品。

細(xì)胞名稱：THLE-2人肝永生化細(xì)胞種屬來(lái)源：人
組織來(lái)源：肝
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞
生長(zhǎng)條件：氣相：100%空氣；溫度：37℃
傳代方法：1:2至1:3，每周 3次
凍存條件：無(wú)血清細(xì)胞凍存液，液氮儲(chǔ)存
支原體檢測(cè)：無(wú)
THLE-2人肝永生化細(xì)胞 培養(yǎng)操作
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）THLE-2人肝永生化細(xì)胞 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加 1 mL血清重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

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