細胞解凍和培養(yǎng)指南

凍存的ATCC細胞株和雜交瘤細胞株在運送過程中使用干冰保持低溫。收到凍存細胞后，可以立即解凍復(fù)蘇，去除二甲基亞砜（DMSO）后進行細胞培養(yǎng)。如果不立即復(fù)蘇培養(yǎng)細胞，必須將細胞凍存管放置于液氮罐氣相層存儲。請不要將細胞存儲在-130℃以上的溫度。如果溫度不夠低，達不到-130℃，細胞活力會迅速下降。

操作推薦

ATCC推薦在操作凍存的ATCC細胞株時使用手套，工作服和防護面具以避免任何事故發(fā)生。

檢查包裝，查看是否有任何破裂或滲漏。凍存的ATCC細胞株應(yīng)處于固體狀。

將凍存的ATCC細胞株從有干冰的包裝中取出，立即復(fù)蘇培養(yǎng)，或迅速轉(zhuǎn)移放置在液氮罐氣相層在-130℃以下的溫度存儲。

凍存細胞的復(fù)蘇和培養(yǎng)

1、先準備好細胞培養(yǎng)皿或細胞培養(yǎng)瓶，及產(chǎn)品說明推薦的相應(yīng)細胞培養(yǎng)基。并在37℃水浴中預(yù)先溫熱細胞培養(yǎng)基。（請參閱：注1）

2、小心取出裝有細胞的凍存管，保持管蓋擰緊，將凍存管蓋以下的部分置于37℃水浴中并輕微的攪拌以幫助解凍。解凍過程應(yīng)該盡快，大約短于2分鐘或待后一塊小冰晶體剛?cè)诨蛻?yīng)將細胞凍存管取出水浴。

3、在水浴中取出的細胞凍存管表面噴灑70%乙醇配制的消毒劑，用無菌紙巾或紗布拭干。之后的操作步驟都應(yīng)該遵循在無菌條件下生物安全柜中嚴格操作。

4、小心擰開凍存管的頂部，將管內(nèi)容物用1ml移液槍轉(zhuǎn)移到含9毫升培養(yǎng)基的無菌離心管中。離心5到7分鐘（125xg），小心吸去上清液以去除抗凍劑（二甲基亞砜），避免丟失細胞沉淀。將細胞沉淀重懸于配好的*培養(yǎng)基中。將細胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)容器，輕輕搖晃使細胞均勻的分布。生長較慢的細胞株可重懸于5-8ml培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移到T25培養(yǎng)瓶。生長較快的細胞株可重懸于12-20ml培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移到T75培養(yǎng)瓶。

5、將細胞培養(yǎng)容器置于細胞培養(yǎng)箱，在溫度37℃，二氧化碳濃度5%的培養(yǎng)條件下進行孵育。細胞培養(yǎng)24小時后應(yīng)在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)和生長狀況。（請參閱：注2）

*注1：雖然大多數(shù)細胞株可以在一種以上的培養(yǎng)基中生長，但細胞的特征有可能會在更換不同培養(yǎng)基時發(fā)生。為保證好的效果，請從細胞培養(yǎng)一開始就使用ATCC推薦的培養(yǎng)基。

*注2：某些細胞株，如雜交瘤株，可能需要幾天的時間才從凍存狀態(tài)下*恢復(fù)正常生長。在細胞復(fù)蘇培養(yǎng)天可能會呈現(xiàn)較低的細胞活力并產(chǎn)生一些細胞碎片。度過這一時期后，細胞會恢復(fù)并進入指數(shù)增長期。

武漢中昌國研標物科技有限公司提示您：

細胞株的生長有兩種狀態(tài)，貼壁細胞需要附著在一個表面進行生長（貼壁依賴性），懸浮細胞可在懸浮培養(yǎng)狀態(tài)下生長（非貼壁依賴）。在細胞單層貼壁生長貨懸浮生長中，都通常遵循四個特征性階段：遲滯期、對數(shù)或指數(shù)期、靜止或平臺期及衰退期。