本試劑盒采用間接ELISA法，在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被純化的FMD病毒抗原。在試驗(yàn)中，加入稀釋后的待檢血清，經(jīng)過溫育后，若樣品中含有FMD病毒特異性抗體，則與包被板上的抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶結(jié)合物，與檢測(cè)板上的抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物；在微孔中加入TMB底物液，經(jīng)酶催化形成藍(lán)色產(chǎn)物，加入終止液終止反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)測(cè)定反應(yīng)

A型口蹄疫抗體檢測(cè)試劑盒

使用說明書

【介紹】

A型口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus, FMDV）抗體檢測(cè)試劑盒可用于檢測(cè)豬、牛、羊血清中的A型口蹄疫病毒抗體，用于評(píng)估A型口蹄疫苗免疫狀況。

本試劑盒采用間接ELISA法，在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被純化的FMD病毒抗原。在試驗(yàn)中，加入稀釋后的待檢血清，經(jīng)過溫育后，若樣品中含有FMD病毒特異性抗體，則與包被板上的抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶結(jié)合物，與檢測(cè)板上的抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物；在微孔中加入TMB底物液，經(jīng)酶催化形成藍(lán)色產(chǎn)物，加入終止液終止反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)測(cè)定反應(yīng)孔中的吸光度A值。

【組份】

1	抗原預(yù)包被板條	1/2塊	7	陰性對(duì)照	0.8/1.6ml
2	酶結(jié)合物	11/22ml	8	陽(yáng)性對(duì)照	0.8/1.6ml
3	10倍濃縮洗滌液	50/100ml	9	血清稀釋板	1/2塊
4	顯色液	11/22ml	10	封板膜	2/4張
5	樣本稀釋液	50/100ml	11	說明書	1份
6	終止液	6/11ml

 

【需自備的設(shè)備及試劑】

微量移液器： 0.5µl-10µl、10µl-100µl、100µl-1000µl。

一次性移液器吸頭。量筒：500ml。96孔板酶標(biāo)儀。蒸餾水或去離子水。洗瓶或洗板機(jī)。

【樣品制備】

取動(dòng)物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無(wú)溶血。

【洗滌液的準(zhǔn)備】

濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫，如有鹽結(jié)晶，搖動(dòng)使結(jié)晶的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

【樣品的稀釋】

在血清稀釋板中按1：100的體積比稀釋待檢血清。

注意：陰性和陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋。取每個(gè)樣品后都要更換吸頭，準(zhǔn)確記錄每個(gè)樣品在板上的位置。每個(gè)樣品在加入到包被板微孔前應(yīng)充分混勻。

【注意事項(xiàng)】

試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫，應(yīng)將試劑盒各組份放置室溫至少1小時(shí)以上。使用前應(yīng)搖勻，使用后放回2-8℃。

不同品種、不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時(shí)應(yīng)防止試劑污染。

底物和終止液對(duì)皮膚和眼可能有刺激性，使用時(shí)應(yīng)該注意防護(hù)。

TMB（顯色液）不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑。

檢測(cè)板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中，并盡快置于2-8℃)。

所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。

嚴(yán)格遵守操作說明可以獲得很好的結(jié)果。操作過程中移液、定時(shí)和洗滌等的全部過程必須精確。

血清稀釋板為一次性用品，不得重復(fù)使用；血清稀釋板的大容量為300μl/孔。

【操作步驟】

取預(yù)包被的檢測(cè)板（根據(jù)樣品多少，可拆開分次使用），將稀釋好的待檢血清取100μl加入到檢測(cè)板孔中。同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照各2孔，取陰性及陽(yáng)性對(duì)照各100μl分別加入反應(yīng)孔中輕輕振勻孔中樣品（勿溢出）。

蓋上封板膜（可按實(shí)際需要自行裁剪），置37℃溫育30分鐘。

小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作濃度洗滌液每孔加250ul，后甩去孔內(nèi)液體，以上步驟重復(fù)4-6次，后在干凈吸水紙上拍干。

每孔加酶結(jié)合物100μl，蓋上封板膜，置37℃溫育30分鐘。

小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗滌4-6次, 方法同3。切記后在干凈吸水紙上拍干。

每孔加顯色液100µl，輕微震蕩混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色10分鐘。

每孔加終止液50μl，使反應(yīng)終止，10分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果。

【結(jié)果判定】

用酶標(biāo)儀于450nm（630nm作參比波長(zhǎng)）讀取吸光度OD值。

試驗(yàn)成立的條件是：

陰性對(duì)照（N）OD值<0.20，同時(shí)陽(yáng)性對(duì)照（P）OD值>0.3。

計(jì)算方法：

（樣品OD值-陰性O(shè)D均值）÷（陽(yáng)性對(duì)照OD均值-陰性O(shè)D均值）=  IRPC值

陰陽(yáng)性判斷：

IRPC<0.4判為陰性;0.4≤IRPC<0.45判為可疑；IRPC≥0.45則判斷為陽(yáng)性。

【有效期】

貯存方法： 2 - 8ºC下貯存有效期為 12個(gè)月。